Консультации онлайн. Анализ кср расшифровка Антитела к бледной трепонеме IgM

Очень важно вовремя распознать болезнь. В определенный момент человека могут направить на анализ крови КСР, который позволяет определить, есть ли сифилис у человека или же его нет.

Существует несколько показаний, когда необходимо сдать кровь на наличие или отсутствие сифилиса в организме человек.

К таким показаниям относят:

Беспорядочные половые связи (как случайные, так и нет).Не всегда люди во время полового акта предохранятся, и поэтому риск заболеть сифилисом повышается в несколько раз.
Подготовка перед операцией, когда врачам очень важно знать об общем состоянии организма человека и о том, нужно ли предпринимать какие-то лишние меры безопасности, чтобы не заразится самим.
Беременность, во время которой очень важно провести полную диагностику организма будущей мамы и понять, насколько велики шансы выносить малыша. Да и к тому же сифилис представляет опасность для ребенка, и поэтому, в некоторых случаях это может сподвигнуть к прерыванию беременности.
Планирование беременности. Данный процесс рассчитан на то, что будущие родителями сознательно проходят обследование, чтобы подойти к вопросу зачатия серьезно. Во время этого мероприятия выявляются все возможные болезни, а также имеющиеся инфекции, которые нужно сразу же лечить.
Язвы на половых органах, которые могут свидетельствовать о наличие серьезного и опасного заболевания.
Обильные выделения из половых органов различного характера.
Увеличение лимфатических узлов, преимущественно в области паха.
Сыпь на теле, которая может сопровождаться сильным зудом.
Болезненные ощущения в области костей.

Также, крови на сифилис (КСР) сдается при каждом профилактическом осмотре с одной целью, чтобы вовремя обнаружить проблему.

Как правильно подготовиться для сдачи крови на анализ КСР

Пациенту, который получил направление на анализ КСР необходимо воздержаться от употребления пищи минимум за 8 (а желательно за 12) часов до самой процедур, так как иногда это может привести к получению либо ложноположительного, либо ложноотрицательного анализа.

Если же у человека нет возможности не кушать такой продолжительный период времени (например, диабетики или беременные женщины), то необходимо исключить чай, кофе, любые соки. Пить разрешается только простую воду (кипяченую или фильтрованную).

В тот момент, когда ученые получили такой способ диагностики сифилиса, стало возможным выявить его даже при скрытом течении.

Реакция Вассермана имеет особое значение для любого венеролога, потому что:

Позволяет определить даже момент заражения, конечно, не с точностью до дней, но примерный промежуток и срок болезни вполне.
Можно определить наличие сифилиса даже в том случае, если он протекает в скрытой форме.
Это единственный нормальный показатель того, насколько эффективно протекает лечение и есть ли положительная динамика.

Больше информации об анализе можно узнать из видео.

Ложноположительный результат может быть в следующих случаях:

Во время беременности, так как организм в этот момент подвергается сильной нагрузке.
При сахарном диабете.
При туберкулезе любой формы.
При наличии злокачественных опухолей в организме (онкология).
При злоупотреблении алкогольными напитками.
При вирусном гепатите, когда печень работает не так, как того требует организм.
При пневмонии, особенно в тяжелых формах ее течения.

Также, ложноположительный результат может наблюдаться у людей после вакцинации, поэтому при получении такого результата, нужно сказать об этом врачу. Что же касается ложноотрицательных результатов, то такое встречается очень редко.

КСР анализ крови является очень важным методом диагностики, который позволяет вовремя обнаружить болезнь и начать лечение.

Конечно, не всегда болезнь обнаруживается на ранней стадии. Именно поэтому каждый год, особенно если были случайные половые связи, необходимо сдавать анализ крови, чтобы не доводить болезнь до тяжелой стадии, вылечится на которой уже проблематично.

источник

Если сифилис не лечить, у больного через несколько лет начинают разрушаться внутренние органы. Человек может страдать десятилетиями, а смерть будет болезненной. Анализ на сифилис позволяет вовремя диагностировать заболевание и назначить лечение, прежде всего – антибиотикотерапию. Сколько времени уйдет на лечение, зависит от стадии заболевания и правильно назначенного лечения: на начальном этапе от болезни можно избавиться за три-четыре месяца. Самостоятельно сифилис не лечится.

Возбудителем сифилиса является бактерия, которая называется Бледная трепонема (Treponema pallidum). Она способна проникнуть в организм даже через незначительные повреждения, и хоть передается в основном половым путем, человек может заразиться и через предметы обихода. Правда, следует знать, что бактерия погибает через полчаса при температуре выше 48 градусов. Вот почему важна стерилизация.

Выделяют первичную, вторичную, латентную и третичную стадии сифилиса. Первые признаки недуга – это язва на коже, которая исчезает примерно через 5 недель . Спустя два месяца появляются признаки вторичного сифилиса в форме сыпи, язв и узелков. Одним из тяжёлых осложнений этой формы является поражение почек. Это состояние сопровождается протеинурией – повышенным содержанием белка в тесте мочи (выше 2-3 г/л). Обычно сыпь проходит через несколько недель без лечения.

Если болезнь не лечить, развивается третичный сифилис. Он проявляется через пять лет, когда происходит разрушение внутренних органов. Поражается нервная, сердечно-сосудистая системы, спинной и головной мозг. Выходят из строя почки, печень, желудок, кишечник.

Особенно опасна ситуация, если человек болен ВИЧ. Как и сифилис, ВИЧ наиболее часто передается половым путем и трудно лечится. При этом больные сифилисом подвергаются опасности подхватить ВИЧ, а больные ВИЧ рискуют заболеть сифилисом. Если сифилис подхватил ВИЧ-инфицированный, эффективность лечения зависит от стадии заболевания: чем дольше человек болен ВИЧ, тем больше риск развития тяжёлых осложнений сифилиса (особенно, если ВИЧ-инфицированный не лечится).

Если говорить о том, откуда забирают кровь на сифилис, то ответ таков: как и для определения ВИЧ, материал берется из вены. Иногда врач может назначить взять образец из пальца, но только при проведении неспецифических быстрых тестов. Связано это с тем, что многие нормы разработаны для венозной крови: в крови, взятой из пальца, показатели иные. Кроме того, из пальца материала на изучение можно получить меньше, чем из вены. Если же надо взять образец для анализа на сифилис из пальца, применяется та же лабораторная техника, как и для общего анализа крови.

Если исследование крови из пальца показало вероятность наличия бледой трепонемы, необходимо провести более развернутое, расширенное исследование. Кровь на сифилис в этом случае берут только из вены: лишь в этом случае можно получить правильный отрицательный или положительный результат.

Такая разновидность анализа, как мазок, в случае с сифилисом, как и с ВИЧ, неэффективна. В мазке возбудитель болезни отсутствует на всех стадиях заболевания.

Для определения антител к бледной трепонеме в крови применяются следующие тесты:

РИФ или FTA (реакция иммунофлюоресценции) – определяется реакция поглощения флюоресцирующих антител.
РПГА или TPHA (реакция пассивной гемагглютинации) – анализ на сифилис, выявляющий антитела IgM и IgG.
ИФА или ELISA – название расшифровывается как иммуноферментный анализ, определяет количественное содержание антител IgG и IgM.

Сифилис позволяют обнаружить трепонемные и нетрепонемные анализы. Первый тест на сифилис обнаруживает в крови антитела против антигенов к Treponema pallidum. Второй выявляет антитела против тканей, что разрушила бактерия.

ИФА является эффективным тестовым методом, который делается не только, чтобы определить наличие инфекции, но и определить стадию болезни. Кроме того, ИФА способен дать ответ на вопрос, болел ли данный человек когда-нибудь сифилисом. Чувствительность ИФА может достигать 90%.

Анализ ИФА позволяет определить антитела к Бледной трепонеме: иммуноглобулины – G, M, A. Их концентрация позволяет проследить процесс заболевания в его динамике.

Сразу после инфицирования иммунитет для борьбы с бактерией вырабатывают антитела IgA, через две недели – IgM. Через месяц появляются IgG . Когда начинают проявляться клинические симптомы недуга, кровь на сифилис показывает достаточное количество антител всех трех видов.

Исследования показывают, что специфические к сифилису антитела IgM резко уменьшаются после эффективного лечения. Особенность антител IgG состоит в том, что тест на сифилис выявляет их даже через большое время после излечения и на протяжении всей жизни пациента. Поэтому положительный результат ИФА не всегда значит наличие возбудителя сифилиса. Положительный тест может определить как стадию развития заболевания, так и то, что недавно было проведено эффективное лечение, а потому антитела еще циркулируют в крови. Отрицательный результат ИФА может означать как отсутствие заболевания, так и его раннюю стадию.

РПГА относится к специфическим трепонемным методам выявления возбудителя бледной трепонемы. При проведении анализа РПГА во время реакции антител и эритроцитов происходит слипание последних и выпадение их в осадок. Сколько осаждённых эритроцитов образуется при РПГА, прямо пропорционально к количеству антител трепонемы.

Чувствительность РПГА намного эффективнее во вторичном и третичном периоде сифилиса – 99%, тогда как в первичном достоверность анализа составляет 85%.

Специфичность РПГА позволяет его использовать для подтверждения диагноза других тестов, таких, как RPR или МРП. В тоже время РПГА не является настолько чувствительным к стадиям сифилиса, так как ИФА. Поэтому РПГА и ИФА надо рассматривать в комплексе друг с другом. Ложный, положительный результат РПГА возможен в 2,5 % случаев. Это возможно из-за сходства иммуноглобулинов с другими антителами, что выделяются при некоторых других заболеваниях, например, аутоиммунных.

Комплекс серологических реакций (КСР), один из которых известен как реакция Вассермана, является ценным диагностическим методом. Он позволяет как выявить инфекцию, так и определить стадию заболевания. Анализ крови на сифилис КСР в обязательном порядке должен быть дополнен трепонемно-специфическими методами анализа (РИБД и ИФА). Для проведения теста КСР используют антигены, извлеченные из сердечной мышцы крупного рогатого скота, которые по своим свойствам схожи с антигенами бледной трепонемы.

КСР не является специфичным анализом для сифилиса: положительный КСР возможен у больных туберкулёзом, малярией, при аутоиммунных заболеваниях, онкологии, во время беременности и других состояний. Анализ на сифилис при беременности сдавать обязательно, поскольку наличие этого заболевания у беременной может привести к выкидышу или рождению ребенка с врождённым недугом.

Экспресс-метод являет собой ускоренный вариант реакции Вассермана. При проведении экспресс-теста на сифилис также используют кардиолипидный антиген, который смешивают с сывороткой в выемке специальной стеклянной пластины.

Сколько времени уходит на выполнение теста, часто зависит от техники проведения. Обычно время выполнения экспресс-метода составляет около получаса.

Результат реакции экспресс-метода оценивается так же, как и КСР, положительными числами, от 0 до +4. Чувствительность экспресс-метода хоть и превосходит КСР, может выдать ложный положительный результат из-за другой болезни.

ОРС и УМСС являются ещё одним вариантом реакции Вассермана или экспресс метода. Расшифровка аббревиатуры УМСС обозначает ускоренный метод на скрытый сифилис. ОРС расшифровывается как отборочная реакция на сифилис. При проведении ОРС используются те же реактивы, что и при реакции Вассермана.

Чтобы получить точные данные, кровь на сифилис надо сдавать натощак. Понятие, натощак означает, что между приёмами пищи должно пройти не менее восьми часов. Если пациент пришёл сдавать анализ натощак, но последний раз принимал пищу меньше, чем за восемь часов, ему необходимо подождать. Понятие натощак также значит, что нельзя употреблять перед анализом любые напитки, кроме негазированной воды. Анализы сдают натощак не только для диагностики сифилиса: это общее правило.

Отрицательный анализ на сифилис обозначается знаком «-». Но отрицательный результат не всегда означает, что возбудителя болезни в организме нет. Чаще ложный отрицательный результат бывает при расшифровке быстрых тестов, основанных на реакции Вассермана. Поэтому расслабиться можно лишь тогда, когда данные всех анализов дадут отрицательный результат.

Самым высоким рейтингом доверия среди больных сифилисом является результат ПЦР . Если ПЦР положительный, это значит, что он действительно положительный. Если расшифровка отрицательна, то – отрицательный. Но ПЦР способен показать положительный результат и после успешного лечения, поскольку способен определить наличие как живой, так и мертвой бактерии. Ложный результат после успешного лечения могут выдать и другие тесты.

Люди, особенно мужчины, нечасто выражают желание регулярно обследоваться у врача. Что касается сифилиса, то причиной этого может быть, как не проявляющие себя симптомы вялотекущего заболевания, так и стыд, нежелание, чтобы окружающие узнали о болезни.

Поэтому очень многие часто соглашаются пройти анонимное обследование, при этом хотят получить гарантию, что лечение также будет действительно анонимным. Конечно же, анонимно сдать анализ на сифилис проблем нет. Они возникают, когда больной хочет анонимно лечиться. Дело в том, что человек является носителем опасной венерической болезни и может заразить как близких ему людей, так и постороннего человека. Поэтому медлить ни в коем случае нельзя и во время лечения обязательно выполнять все указания врача.

источник

Лабораторные исследования плазмы крови были и остаются главным способом диагностики и мониторинга сифилиса.

Этой болезни непостоянны, а скрытые формы вообще внешне не видны. Среди всего многообразия серологических методик, самые достоверные результаты предоставляет анализ на сифилис РИФ.

РИФ – это реакция иммунофлюоресценции. По диагностическим возможностям эта методика относится к непрямым специфическим тестам. То есть сам возбудитель обнаружить с ее помощью не выйдет. Но по косвенным признакам можно сделать обоснованное заключение о наличии или отсутствии бледной трепонемы в организме.

Для исследования требуются:

Образец крови пациента. Как правило, используется венозная, однако имеются варианты проведения РИФ с капиллярной кровью из пальца.
Типовой, промышленного изготовления, трепонемный антиген. Это особые белки спирохеты, которые служат «якорями» для антител к бледной трепонеме из сыворотки больного.
Стандартная с белками-иммуноглобулинами, которые связываются с антителами крови пациента.
Люминесцентный микроскоп.

Эта реакция обладает очень высокой специфичностью и чувствительностью. Но обходится недешево и ставится не так уж и легко. Поэтому в основном используется для верификации диагноза в сомнительных и ложноположительных случаях.

Алгоритм постановки реакции иммунофлюоресценции состоит из нескольких шагов. В немалой степени из-за сложности проведения этой методики, она не подходит для массовых скрининговых исследований.

Полученным от пациента образцом крови/плазмы, обрабатывают предметное стекло, на котором находится высушенный трепонемный антиген. Его получают из тканей яичка кролика, зараженного спирохетой штамма Никольса.
Выдержав несколько минут, стекло промывают дистиллированной водой.
Промытый образец обрабатывают специальной сывороткой промышленного изготовления, которая содержит в себе собственные антитела к человеческим противотрепонемным антителам. Иммуноглобулины этой сыворотки заранее помечены специальным веществом, которое под ультрафиолетом светится желто-зеленым цветом.
Затем снова следует промывка.
Предметное стекло помещается в люминесцентный микроскоп и изучается.

Если лаборант наблюдает в окуляре микроскопа характерное свечение, значит, антитела к бледной трепонеме в крови пациента были. Они связались с типовым антигеном. А на них, в свою очередь, прореагировали меченные люминофором иммуноглобулины из стандартизированной промышленной сыворотки.

В серологической диагностике сифилиса, очень важно получить достоверный и точный результат.

Чтобы повысить качество данных, предпринимаются определенные действия:

Исследуемая сыворотка разводится в 200 раз (1:200), чтоб избежать ложноположительных реакций. Тогда говорят, что проводится анализ на сифилис РИФ 200 .
В другом варианте, при разведении сыворотки 1:5, дополнительно используется специальный абсорбент, который собирает на себе «лишние» антитела, чтоб они не искажали результаты.

На руку исследователям играют и размеры трепонем. Крупные микробные тела спирохет хорошо заметны при люминесцентной микроскопии. Если на них «прицепляются» меченные люминофором белки из сыворотки. Использование стандартизированного антигена и сывороток, позволяет до максимума повысить чувствительность и специфичность РИФ в диагностике сифилиса.

Один из альтернативных способов называется РИФ-Абс. От обычной методики он отличается низким разведением исследуемой сыворотки – 1:5 против 1:200, как обычно.

В концентрированном образце содержится очень много активных белковых молекул.

Чтоб избежать и повысить чувствительность, сыворотку обрабатывают специальным абсорбентом из фрагментов сифилитических спирохет. Сорбент собирает на себе излишне активные антитела и потом уже образец обрабатывают промышленной, меченной люминофором сывороткой. Благодаря такой предварительной подготовке, отсеиваются все лишние молекулы, которые могли бы повлиять на результаты теста.

Ставят ее по таким показаниям:

Положительная на фоне клинического благополучия и отсутствии рисков заражения в анамнезе.
Позитивная РВ у больных, страдающих хроническими заболеваниями.
Отрицательная РВ при появлении подозрительных в отношении сифилиса симптомов.

Первые позитивные результаты появляются уже на 15-16 день с момента инфицирования. Если реакция из положительной становится отрицательной, это сигнализирует о полном излечении от сифилиса. Вероятность ложноположительного результата составляет меньше 0,4%.

Такая ситуация может произойти при обследовании онкобольных, алкоголиков, беременных женщин и страдающих расстройствами иммунитета людей.

Определенная доля приходится и на технические ошибки, так как постановка достаточно сложная. Бывают случаи, когда необходимо отличить врожденную патологию от приобретенной. Сделать это можно, если поискать разные виды антител в крови пациента.

Антитела к сифилису класса M (IgM), появляются вскоре после заражения и по времени намного опережают IgG. Выявить их позволяет анализ на сифилис РИФ абсорбции IgM. Если результаты постановки этой реакции будут положительными, то можно говорить о недавнем заражении. Так случаи реинфекции можно отличить от рецидива или выявить заражение ребенка после родов.

По итогам такой методики анализов РИФ, также делают вывод об эффективности лечения раннего сифилиса.

При подозрении на сифилис обращайтесь к опытному венерологу.

Сифилис – одно из самых распространенных венерических заболеваний, которое поражает внутренние органы, кожные покровы и центральную нервную систему. Существует возможность заражения сифилисом не только половым, но и бытовым путем: через посуду, постельное белье, предметы личной гигиены и другие вещи, которыми пользовались или к которым прикасались больные люди.

Чтобы определить, больны вы или нет, необходимо обратиться к врачу, который проведет осмотр и выпишет направление на анализы. Лабораторная диагностика выявляет возбудителя сифилиса – бледную трепонему. Материалом для исследования может быть как плазма крови, так и отделяемое из кожных высыпаний, иногда образцы, полученные при пункции лимфатических узлов. Но все же основным видами лабораторной диагностики сифилиса являются серологические анализы, в частности, анализ крови на сифилис.

В сети клиник «МедЦентрСервис» Вы можете сдать кровь на определение возбудителя сифилиса несколькими методами:

Реакцией Вассермана;
Реакцией микропреципитации с кардиолипиновым антигеном - RPR;
Иммуноферментным анализом крови (ИФА);
Исследованием реакции иммунофлюоресценции (РИФ);
Реакцией иммобилизации бледных трепонем (РИБТ).
Анализом на реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА);

Определяет антилипидные антитела (реагины). К сыворотке крови пациента добавляют сифилитические антигены, образующие с реагинами иммунный комплекс, способный адсорбировать и связывать комплемент. Если такой комплекс образуется, то разрушение эритроцитов (гемолиз) не происходит, и они выпадают в осадок (положительная реакция). Если в сыворотке пациента нет реагинов, то происходит гемолиз, и эритроциты в осадок не выпадают (отрицательная реакция).

Или реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном – это скрининговый метод диагностики сифилиса. Данная реакция в определенной степени может рассматриваться как более современная модификация реакции Вассермана. Основным показанием к проведению этого теста является первичное обследование на сифилис, медицинские осмотры, контроль эффективности лечения. Положительный результат требует проведения других, более точных тестов для подтверждения диагноза.

Один из самых перспективных методов лабораторной диагностики сифилиса. Его принцип - выявление специфического комплекса антиген-антитело, который образуется при соединении сифилитических антигенов, абсорбированных на твердом носителе, с антителами исследуемой сыворотки крови. В настоящее время наиболее распространенным является непрямой вариант ИФА, на заключительном этапе которого используются антитела к иммуноглобулинам человека, конъюгированные с пероксидазой хрена или другими ферментными маркерами. Измеряется окрашивание конечных продуктов этой реакции, которая зависит от количества связанных антител сыворотки.

В ходе реакции иммунофлюоресценции (РИФ) определяется интенсивность свечения бледных трепонем в препарате, которая возникает только в присутствии антитрепонемных антител в сыворотке крови. Реакция проводится с сывороткой в разном разведении (в 10 и 200 раз).

Наиболее специфичный диагностический тест на сифилис. В сыворотке крови больных производится определение видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые обездвиживают бледные трепонемы в присутствии комплемента. С помощью микроскопа проводится подсчет доли утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем. Кровь методом РИБТ исследуют не ранее чем через 2 недели после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.

Исследование крови методами РИБТ и РИФ выполняют для диагностики скрытого сифилиса. РИФ (10-ти кратное разведение сыворотки) позволяет поставить диагноз даже у тех пациентов, в исследованиях которых бледная трепонема не обнаруживается.

Соединение бледных трепонем сыворотки крови с обработанными специальными методами бараньими эритроцитами. При наличии в сыворотке крови возбудителя сифилиса происходит агглютинация (склеивание и последующее осаждение) эритроцитов. Реагенты вносят в лунки специальных пластин, о результате реакции судят по окрашиванию. Агглютинат эритроцитов имеет темно-красный цвет и форму пятна или кольца.

В сети клиник «МедЦентрСервис» Вы можете сдать кровь на сифилис любым из вышеописанных методов. Кровь на анализ нужно сдавать из вены, натощак (не менее 4 часов с последнего приема пищи). Не рекомендуется сдавать кровь после приема алкоголя, лекарственных препаратов, а также во время менструального цикла.
Если у Вас есть подозрение, что Вы могли заразиться сифилисом или Вы планируете беременность, то не откладывайте сдачу анализов, приходите в клиники «МедЦентрСервис» .

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - серологическая реакция, позволяющая выявить антитела к известным антигенам. Метод заключается в микроскопии окрашенных мазков.

Данную реакцию используют в иммунологии, вирусологии и микробиологии. Она позволяет определить наличие вирусов, бактерий, грибов, простейших и ИКК. РИФ очень широко применяется в диагностической практике для обнаружения вирусных и бактериальных антигенов в инфекционном материале. Метод основан на способности флюорохрома вступать в связь с белками, не нарушая при этом их иммунологической специфичности. В основном применяется при диагностике инфекций мочеполовых путей.

Различают следующие методы проведения реакции иммунофлюоресценции: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод заключается в окрашивании материала флюорохромами. Благодаря способности антигенов микробов или тканей светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа, они определяются как клетки с ярко окрашенной каймой зеленного цвета.

Непрямой метод заключается в определении комплекса антиген+антитело. Для этого опытный материал обрабатывается антителами антимикробной кроличьей сыворотки, предназначенной для диагностики. После того как антитела свяжутся с микробами, их отделяют от не связавшихся и обрабатывают антикроличьей сывороткой, помеченной флюорохромом. После этого комплекс микроб+анимикробные антитела+анитикроличьи антитела определяется с помощью ультрафиолетового микроскопа также, как и при прямом методе.

Реакция иммунофлюоресценции незаменима при диагностике сифилиса. Под воздействием флюорохрома возбудитель сифилиса определяется как клетка с желто-зеленой каймой. Отсутствие свечения означает, что пациент не заражен сифилисом. Этот анализ часто назначается при положительной реакции Вассермана. Данный метод очень эффективен при диагностике, так как позволяет определить возбудителя на ранних стадиях заболевания.

Кроме того, что РИФ позволяет диагностировать сифилис, его также применяют для определения наличия таких возбудителей как хламидии, микоплазма, трихомонады, а также возбудителей гонореи и генитального герпеса.

Для проведения анализа используют мазки или венозную кровь. Процедура взятия мазка совершенно безболезненная и не представляет никакой опасности. К сдаче данного анализа необходимо подготовиться. За двенадцать часов до него не рекомендуется пользоваться средствами гигиены, такими как мало или гели. Также иногда по показаниям врача проводиться провокация. Для этого рекомендуют прием острой пищи или алкоголя или проводится инъекция провоцирующего вещества, например гоновакцина или пирогенал. Помимо этого промежуток между приемом антибактериальных препаратов и сдачей анализа должен быть не менее четырнадцати дней.

При оценке результатов следует учитывать тот факт, что свечение наблюдается не только у живых бактерий, но и у мертвых, особенно это относится к хламидиям. После курса антибиотиков мертвые клетки хламидий также обладают свечением.

При правильной подготовке пациента и соблюдении техники взятия мазка, данный анализ позволяет определить заболевания на ранних стадиях, что очень важно для своевременного лечения. Положительными сторонами данного метода является короткие сроки получения результата, простота выполнения и небольшая стоимость анализа.

К недостаткам можно отнести то, что для проведения анализа необходимо достаточно большое количество исследуемого материала. Кроме того, оценку результатов может проводить только опытный специалист.

РИФ - реакция иммунофлюоресценции - трепонемный тест. Является одним из самых чувствительных анализов на сифилис. РИФ становится положительной через 10-20 дней после инфицирования, что относит ее к методам раннего выявления сифилиса.

Постановка РИФ проводится у лиц с симптомами сифилиса, при этом отрицательными реакциями - РМП, РВ;
в качестве дифференциальной реакции у лиц с положительными реакциями RW, микрореакции и отсутствием симптомов;
у беременных при отсутствии клинических проявлений и сифилиса в анамнезе.

При проведении реакции в сыворотку пациента добавляется кровь кролика, зараженная бледной трепонемой(возбудитель сифилиса) и флюоресцирующая(светящаяся) сыворотка. Исследование заключается в наблюдении свечения комплексов под люминесцентным микроскопом. Результаты реакции интерпретируются в зависимости от интенсивности свечения от 1+ до 4+, что указывает на наличие сифилиса. Отсутствие свечения - отрицательный результат РИФ обозначает, что обследуемый здоров. Ложные результаты анализа встречаются крайне редко при системных процессах, беременности и т.д.
Реакция ставится в модификации РИФ-200 и РИФ-авс(абсорбция).
Чувствительность реакции при первичном сифилисе составляет порядка 85%
при вторичном сифилисе - 100%
при третичном сифилисе - 98-100% .

Негативация РИФ происходит в течение нескольких лет после лечения сифилиса. После проведенной противосифилитической терапии необходимо наблюдение за показателями в динамике.

РИБТ - реакция иммобилизации бледных трепонем - является самым специфичным анализом крови на сифилис. РИБТ высококачественный, дорогостоящий анализ крови, выполнение которого могут позволить себе хорошо оснащенные лабораторные комплексы. РИБТ является основополагающей реакцией при скрытых формах сифилиса, нейросифилисе, висцеросифилисе. Позволяет отдифференцировать ложноположительные реакции от истинного заболевания сифилисом.

Постановка реакции основана на обездвиживании (иммобилизации) возбудителя сифилиса видоспецифичными антителами. Путем микроскопического исследования читается результат реакции: 0-20% - отрицательная, 21-30%- сомнительная, 31-50% - слабоположительная, 51-100% - положительная реакция. То есть к положительным результатам на сифилис относятся те, где РИБТ более 50%. При сифилисе РИБТ становится положительной достаточно медленно: в первичный периоде сифилиса она еще отрицательна, во вторичном свежем периоде - положительна в 50% случаев, во вторичном рецидивном периоде - положительна в 90-100%, в третичном периоде - положительна в 99-100%.

Негативация РИБТ осуществляется десятилетиями, поэтому как критерий достоверности излеченности ее использовать неправомочно, тем не менее динамическое наблюдение после проведенного противосифилитического лечения необходимо.

Проведение реакции РИБТ целесообразно не ранее чем через 30 дней после окончания лечения. РПГА - реакция пассивной гемагглютинации - относится к трепонемным тестам, проводится в комплексе с нетрепонемными. Используется для подтверждения диагноза сифилиса на любой его стадии.

Реакцию целесообразно проводить через 4 недели после предполагаемого заражения. При проведении реакции к сыворотке крови пациента добавляют препарат, приготовленный из эритроцитов животного происхождения, сенсибилизированных антигеном бледной трепонемы - возбудителя сифилиса.

Суть реакции РПГА заключается в склеивании (агглютинации) в присутствии антител к трепонеме и образовании агглютината - фигуры, которую наблюдает врач - лаборант. Реакция оценивается по количеству +: 4+- резкоположительный результат, 3+-положительный, 2+-слабоположительный, 1+-сомнительный, - - отрицательный результат. При положительном результате реакции проводится количественная оценка с определением концентрации (титра) антител. При прогрессировании сифилиса - титр антител постоянно растет.

РПГА остается положительной в течение десятилетий после лечения сифилиса, поэтому не может использоваться в качестве критерия достоверности излеченности. Однако необходимо наблюдать титр антител РПГА в динамике.

Метод обладает высокой чувствительностью. Результаты РПГА могут быть ложноположительны. К таким результатам анализа могут приводить болезни соединительной ткани, некоторые инфекции, и т.д.

Главная » Анализы » Кср отрицательный что значит. Анализ на сифилис риф

источник

Под аббревиатурой КСР понимается комплекс серологических исследований, в процессе проведения которых можно подтвердить или исключить наличие в организме человека возбудителя сифилиса. Опасность данного заболевания заключается в том, что оно может длительное время (даже годами) протекать бессимптомно. Между тем в организме человека за это время происходят необратимые изменения, в частности, разрушаются внутренние органы.

КСР - это лабораторное исследование, которое назначается пациентам с симптомами сифилиса. Об активной жизнедеятельности бледной трепонемы (возбудителя заболевания) свидетельствуют следующие признаки.

Наличие шанкра на половых органах. Это плотное и безболезненное новообразование с ровными краями.
Бессонница.
Постоянное чувство слабости.
Нарушение аппетита, вплоть до его потери.
Частые эпизоды головной боли.
Повышение температуры тела до субфебрильных значений.
Болезненные ощущения в мышцах и суставах.
Бледная сыпь по всему телу.

Важно знать, что анализ крови КСР - это исследование, которое назначается не только при наличии симптомов сифилиса. Существуют и иные показания к его проведению.

Беспорядочные половые контакты.
Диагностика состояния здоровья перед любым видом хирургического вмешательства. Врачам необходимо знать, нужно ли им принимать меры безопасности, чтобы не заразиться опасным заболеванием.
Период вынашивания ребенка. КСР - это анализ, положительный результат которого является поводом для прерывания беременности. Это обусловлено тем, что возбудитель сифилиса представляет серьезную угрозу для плода.
Планирование беременности. В рамках осознанной подготовки к вынашиванию ребенка обязательно назначается анализ КСР. Это позволяет своевременно выявить патологию и принять все необходимые меры для борьбы с ней.

Кроме того, исследование проводится в рамках ежегодных профилактических осмотров.

Результат анализа напрямую зависит от соблюдения рекомендаций врача. Исследование требует тщательной подготовки.

Последний прием пищи перед сдачей биологического материала должен состояться не позднее, чем за 10-12 часов. При этом ужин должен быть легкоусвояемым. Что касается беременных женщин и лиц, страдающих от сахарного диабета, нужно воздержаться от употребления любых жидкостей, кроме чистой негазированной воды.
За 2 суток до исследования необходимо отказаться от физических нагрузок или снизить их интенсивность до минимума.
За несколько дней нужно прекратить прием лекарственных средств. Если это невозможно по жизненным показаниям, необходимо поставить об этом в известность врача.

КСР - это исследование, на результат которого может повлиять даже психоэмоциональное состояние. Врачи рекомендуют перед сдачей крови посидеть 15 минут возле кабинета и постараться максимально расслабиться и успокоиться.

Алгоритм взятия венозной крови стандартный:

медработник накладывает жгут на предплечье (чуть выше локтевого сгиба);
специалист обрабатывает кожный покров в предполагаемой зоне прокола антисептическим средством;
завершающим этапом является введение иглы в вену, снятие жгута и забор биоматериала.

Пробирка маркируется в присутствии пациента и отправляется в лабораторию. Существует несколько методик исследования биоматериала. В настоящее время наиболее распространен анализ крови на КСР МР. Биологический материал исследуется на реакцию микропреципитации, суть которой заключается в образовании и осаждении комплекса антиген-антитело.

Клетки, задачей которых является уничтожение провоцирующего агента, вырабатываются иммунной системой организма не сразу. Антитела IgM продуцируются в течение двух недель с момента заражения бледной трепонемой, IgG - примерно через 1 месяц.

Анализ крови КСР позволяет определить срок заболевания, выявить патологию даже в скрытой форме, а также оценить эффективность ранее назначенного лечения.

Расшифровкой анализа крови КСР занимается венеролог. Однако интерпретировать результаты может каждый. Это обусловлено тем, что расшифровка КСР не представляет сложности, исследование является качественным, то есть его итог может быть положительным или отрицательным.

В первом случае принято говорить о наличии в организме пациента сифилиса (первичного, вторичного или третичного). Положительный результат также может выявляться в течение 1 года после проведенной терапии.

Если в процессе исследования бледная трепонема не была выявлена в биоматериале, и у пациента нет никаких тревожных симптомов, это свидетельствует об отсутствии сифилиса. Но важно знать, что результат может быть отрицательным при раннем заражении и третичной форме недуга.

Не всегда исследование является достоверным. Его результат может быть положительным при наличии у пациента следующих заболеваний и состояний:

сахарного диабета;
новообразований злокачественного характера;
туберкулеза;
аутоиммунных патологий;
вирусных гепатитов;
пневмонии;
энтеровирусной инфекции;
скарлатины;
инфекционного мононуклеоза;
подагры;
малярии;
алкоголизма;
антифосфолипидного синдрома;
эозинофильного инфильтрата в легких.

Кроме того, ложноположительный результат может наблюдаться у малышей на 7-8 день после рождения. Подобная ситуация характерна и для поствакцинального периода.

При получении сомнительного результата необходимо снова сдать кровь на анализ.

Сифилис - это серьезная патология, представляющая опасность не только для здоровья, но и для жизни человека. С целью своевременного обнаружения заболевания назначается анализ крови КСР. Исследование показано не только при наличии клинической картины сифилиса, оно также проводится в рамках обязательных ежегодных профилактических осмотров. Анализ является качественным, то есть результат может быть только положительным или отрицательным. К ложному заключению может привести наличие большого количества заболеваний. При получении сомнительных результатов кровь необходимо сдать повторно.

источник

Сифилис – инфекционное венерическое заболевание, вызываемое спирохетами бледной трепонемы. Пути передачи: при сексе, от матери к плоду, трансфузионно, и значительно реже - через раны на коже, которые вступают в контакт с инфекционными поражениями. В зависимости от стадии, выделяют первичный, вторичный, латентный и третичный сифилис.

Бледные трепонемы не могут расти на питательных средах и не визуализируются под световым микроскопом. Так как обнаружение патогена с помощью обычной микроскопии невозможно, применяют специальный микроскоп с темным полем, где возбудитель виден в виде спирали на темном фоне.

Для проведения микроскопии забирается биоматериал с подозрительного на заболевание очага. Микроскопия в темном поле – это возможный способ оценки кожных поражений, таких как шанкр первичного сифилиса или кондилома вторичного сифилиса. Если материал макулопапулезного очага сухой, исследуют аспират лимфатического узла.

Отрицательный результат не исключает патологический процесс, статистически выявление возбудителя возможно только в 80%.

Реакция, направленная на многократное увеличение ДНК бледной трепонемы, позволяет сделать вывод об инфицировании сифилисом или об его отсутствии.

Биоматериал для анализа может быть любым: кровь, содержимое сифилида, спинномозговой жидкости и пр. Тест подходит для инкубационного периода.

Серологические анализы (КСР или комплекс серологических реакций) считаются наиболее распространенным способом для диагностики всех стадий сифилиса. Выделяют следующие реакции:

агглютинации;
преципитации;
иммунофлюоресценции;
иммуноферментный анализ и пр.

Также серологические анализы на сифилис подразделяют на трепонемные и нетрепонемные.

При подозрении на приобретенный сифилис выполняют скрининговое тестирование, для чего используют нетрепонемные тесты , определяющие антитела к липоидным антигенам тканей хозяина или возбудителя в разнообразных модификациях. В РФ рутинно выполняют реакцию микропреципитации (РМП), которая позволяет выявить антитела к поврежденным патогеном клеткам в крови. Достоверность скрининга высокая, но специфичность невелика, поэтому тестирование подходит для первичного массового обследования в превентивных целях.

Чувствительность экспресс-тестов оценивается в 78-86% для выявления первичного сифилиса, 100% для вторичного сифилиса и 95-98% для выявления третичного сифилиса.

Специфичность - от 85-99%, иногда- менее, что встречается при следующих состояниях:

гестация;
менструация;
онкология;
заболевания соединительной ткани;
туберкулез;
малярия;
вирусные заболевания;
болезни печени;
вакцинация;
«свежий» ИМ;
сыпной тиф и пр.

Помимо этого, избыток жиров в рационе, употребление спиртосодержащих напитков и прием некоторых лекарств могут привести к ложноложительным заключениям.

Результаты скринингового тестирования становятся положительными через 1-2 недели после образования шанкра. Нетрепонемные тесты дают отрицательный ответ через некоторое время после лечения. При ВИЧ-статусе нетрепонемные антитела могут выявляться длительно, иногда на протяжении всей жизни (что подтверждается результатами соответствующего рандомизированнного исследования).

Другие разновидности нетрепонемных анализов: VDRL, плазмореагиновый тест (RPR) , проба с толуидиновым красным, реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (РСКк).

Связывание комплемента – ответ иммунной системы на инфицирование, результат варьируется от отрицательного (ставится «-»), до резко положительного «++++» или 4 плюса.

В начальной стадии первичного сифилиса RW отрицательна.

Из-за возможности ложноположительных результатов для подтверждения любого положительного или сомнительного результата нетрепонемного анализа, используют трепонемные тесты:

реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
гемагглютинация (РПГА),
иммуноферментный анализ (ИФА) для иммуноглобулинов класса G (IgG) и иммуноглобулина М (IgM);
иммуноблоттинг;
РИБТ/РИТ (реакция иммобилизации бледных трепонем).

Трепонемные тесты не используются для оценки эффективности терапии.

РИФ на определение трепонемных АТ класса IgG применяют после положительного результата экспресс-анализов (чувствительность 84% для первичного сифилиса и 100 % при других стадиях, специфичность 96%). Для диагностики врожденного сифилиса у новорожденных не применимы.

В некоторых лабораториях используют «обратные» скрининговые исследования.

CDC (Centers for Disease Control and Prevention, США) рекомендует традиционные исследования, с проверкой количественными нетрепонемными тестами, при положительном результате проводится лечение.

На собранный материал наносят сыворотку с мечеными флюорохромом антителами, специфичными к антигену бледной трепонемы, возбудитель притягивает к себе иммунные комплексы, из-за чего начинает светиться в люминесцентном микроскопе.

До появления гемагглютинации (склеивания) эритроцитов с момента внедрения бледной трепонемы должно пройти не менее 4 недель.

Подготовленные эритроциты с фиксированными белковыми фракциями патогена взаимодействуют с плазмой, если есть антитела к сифилису, происходит реакция.

Подходит для подтверждения любой стадии заболевания.

В основу положена реакция антиген-антитело. Выявляются антитела различных классов, которые можно оценить количественно.

Полученные результаты позволяют судить о длительности патологического процесса, успешности проводимого лечения, иммунологическом статусе, активности возбудителей.

Иммуноблоттинг – разновидность ИФА, применяют для углубленной диагностики при всех сомнительных результатах.

Чувствительность и специфичность близка к 100%, на сегодняшний день ультрачувствительный метод идентификации белков.

Способ основан на реакции антиген-антитело. Антигеном служат бледные трепонемы, культивируемые в тестикулах кролика. При взаимодействии с антителами зараженного человека, патогены утрачивают подвижность. Реакция оценивается с помощью микроскопии в темном поле.

РИБТ в настоящее время применяют из-за трудоемкости реже, но анализ может быть полезен для решения спорных вопросов (ложноположительные реакции на сифилис).

Наибольшую сложность представляет диагностика третичного сифилиса, что обуславливается симптомами со стороны сердечно-сосудистой и нервной системы, а также проявлениями со стороны кожного покрова.

Перечислим заболевания, с которыми проводят дифференциальную диагностику при сифилисе:

Изначально проводится беседа с пациентом, во время которой уточняются детали: когда был подозрительный половой контакт и какие есть жалобы.

После сбора анамнеза переходят к физикальному осмотру, особое внимание уделяется области гениталий и ануса, слизистым оболочкам и лимфатическим узлам. Предварительный диагноз уже может быть установлен. Окончательная верификация происходит с помощью лабораторных анализов.

Если сказать просто о сложном, то одни анализы выявляют возбудителя сифилиса, а другие отражают реакцию организма на внедрение бледной трепонемы.

Для установки окончательного диагноза РПГА следует дополнить 1 трепонемным и 1 нетрепонемным анализом.

Проводятся обязательное исследование на сифилис несколько раз в течение беременности.

Направление на анализ КСР выдается во время первого визита женщины в консультацию, и за время беременности трижды выполняется обследование. Пациентки из высокой группы риска с отягощенным анамнезом: ИППП, асоциальные, зависимые и пр. требуют особенно пристального внимания.

Если результаты анализа положительные, проводят более глубокую диагностику, и по показаниям назначают лечение, которое зависит от стадии и клинических проявлений.

Большинство детей с врожденным сифилисом рождаются у нелеченных матерей, либо получивших терапию слишком поздно.

Трепонемные тесты с использованием неонатальной сыворотки не рекомендуются из-за пассивного переноса антител IgG. Все дети, рожденные от матерей с сифилисом, должны обследоваться с помощью количественного нетрепонемного серологического теста (RPR или VDRL), выполненного с использованием сыворотки крови новорожденного.

Реакция микропреципитации, РИФ и РПГА отрицательны – норма, положительны – подтверждение сифилиса.

Реакция микропреципитации отрицательна, остальные положительны – сифилис в анамнезе после проведения специфической терапии, либо поздняя стадия.

Отрицательная РИФ при положительных РПГА и реакции микропреципитации – результат вызывает сомнения, повторная комплексная оценка.

Отрицательный результат РИФ и микропреципитации, но положительная РПГА – состояние после успешной антибиотикотерапии либо ложноположительный результат.

Положительная РИФ при отрицательных РПГА и реакции микропреципитации – ранняя стадия, проведенное лечение или недостоверность результата.

Положительная реакция микропреципитации, не подтвержденная ни РПГА, ни РИФ – отсутствие сифилиса.

Инструментальная диагностика проводится в зависимости от вовлеченности органов. Например, гранулематозное поражение печени можно увидеть при компьютерной томографии брюшной полости.

Рентгенография органов грудной клетки у пациентов с третичным сифилисом может показать дилатацию аорты. Линейная кальцификация по ходу аорты свидетельствует в пользу сифилитического аортита.

Ангиография может быть полезна в диагностике абдоминальной сифилитической аневризмы.

При диагностике нейросифилиса при соответствующих симптомах используют люмбальную пункцию с забором спинномозговой жидкости.

Мишина Виктория, уролог, медицинский обозреватель

источник

Обычно РВ ставится с двумя или тремя антигенами. Наиболее часто применяется отличающийся высокой чувствительностью кардиолипиновый антиген (экстракт из сердца быка, обогащенный холестерином и лецитином) и трепонемный антиген (обработанная ультразвуком взвесь анатогенных культуральных бледных трепонем). Совместно с реагинами сыворотки крови больного эти антигены образуют иммунный комплекс, способный адсорбировать и связывать комплемент. Для визуального определения образованного комплекса (реагины + антиген + комплемент) в качестве индикатора применяется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент связан в 1 фазе реакции (реагины + антиген + комплемент), гемолиз не наступает - эритроциты выпадают в легко заметный осадок (РВ положительная). Если в 1 фазе комплемент не связан вследствие отсутствия в испытуемой сыворотке реагинов, он будет использован гемолитической системой и произойдет гемолиз (РВ отрицательная). Степень выраженности гемолиза при постановке РВ оценивается плюсами: полное отсутствие гемолиза ++++ или 4+ (РВ резкоположительная); едва начавшийся гемолиз +++ или 3+ (РВ положительная); значительный гемолиз ++ или 2+ (РВ слабоположительная); непонятная картина гемолиза ± (РВ сомнительная); полный гемолиз - (реакция Вассермана отрицательная).

Помимо качественной оценки РВ имеется количественная постановка с различными разведениями сыворотки (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титр реагинов определяется максимальным разведением, еще дающим резко положительный (4+) результат. Количественная постановка РВ имеет значение в диагностике некоторых клинических форм сифилитической инфекции, а также при проведении контроля за эффективностью лечения. В настоящее время реакция Вассермана ставится с двумя антигенами (кардиолипиновый и трепонемный озвученный штамм Рейтера). Как правило, РВ становится положительной на 5-6 неделе после заражения у 25-60% больных, на 7-8 неделе - у 75-96%, на 9-19 неделе - у 100%, хотя в последние годы иногда раньше или позже. При этом, титр реагинов постепенно нарастает и достигает максимальной величины (1:160-1:320 и выше) в случае появления генерализованных высыпаний (сифилис вторичный свежий). При позитивации РВ выставляется диагноз первичного серопозитивного сифилиса.
При вторичном свежем и вторичном рецидивном сифилисе РВ положительная у 100% больных, но у истощенных больных с ослабленным иммунитетом может наблюдаться отрицательный результат. Впоследствии титр реагинов постепенно понижается и при вторичном рецидивном сифилисе обычно не превышает 1:80-1:120.
При третичном сифилисе РВ положительная у 65-70% больных и обычно наблюдается низкий титр реагинов (1:20-1:40). При поздних формах сифилиса (сифилис внутренних органов, нервной системы) положительная РВ наблюдается в 50-80% случаев. Титр реагинов колеблется от 1:5 до 1:320.
При скрытом сифилисе положительная РВ отмечается у 100% больных. Титр реагинов от 1:80 до 1:640, а при позднем скрытом сифилисе от 1:10 до 1:20. Быстрое снижение титра реагинов (вплоть до полной негативации) во время лечения свидетельствует об эффективности лечения.

Недостатки реакции Вассермана - недостаточная чувствительность (в начальной стадии первичного сифилиса отрицательная). Она негативная также у 1/3 больных, если они в прошлом лечились антибиотиками, у пациентов третичным активным сифилисом с поражениями кожи и слизистых, костно-суставного аппарата, внутренних органов, центральной нервной системы, при позднем врожденном сифилисе.
Недостаточная специфичность - реакция Вассермана может быть положительная у лиц, которые ранее не болели и не болеют сифилисом. В частности ложноположительные (неспецифические) результаты РВ отмечаются у больных, которые страдают системной красной волчанкой, лепрой, малярией, злокачественными новообразованиями, поражениями печени, обширными инфарктами миокарда и другими заболеваниями, а иногда у совершенно здоровых людей.
Кратковременная ложноположительная реакция Вассермана выявляется у некоторых женщин перед родами или после них, у лиц, злоупотребляющих наркотиками, после наркоза, приема алкоголя. Как правило, ложноположительная РВ выражена слабо, чаще с низким титром реагинов (1:5-1:20), положительная (3+) или слабо положительная (2+). При массовых серологических обследованиях частота ложноположительных результатов составляет 0,1-0,15%. Для преодоления недостаточной чувствительности, пользуются постановкой на холоде (реакция Колляра) и одновременно она ставится с другими серологическими реакциями.

Псевдорезистентность - после проведенного лечения несмотря на положительные серологические реакции бледная трепонема в организме отсутствует. Антигена в организме нет, но продолжается выработка антител, которые фиксируются при постановке серологических реакций.
Серологическая резистентность может развиваться вследствие:

неполноценного лечения без учета давности и стадии заболевания;
недостаточной дозы и в частности из-за неучета массы тела пациентов;
нарушения интервала между введением препаратов;
сохранения в организме бледных трепонем несмотря на проведенное полноценное специфическое лечение, из-за их стойкости к пенициллину и другим химиопрепаратам в случае наличия скрытых, осумкованных очагов поражения во внутренних органах, нервной системе, лимфатических узлах, которые малодоступны для антибактериальных препаратов (нередко бледные трепонемы обнаруживаются в тканях рубца через много лет после окончания терапии, в лимфатических узлах иногда удается обнаружить бледные трепонемы через 3-5 лет после противосифилитической терапии);
снижения защитных сил при различных заболеваниях и интоксикациях (эндокринопатии, алкоголизм, наркомания и др.);
общего истощения (приемом пищи бедной витаминами, белками, жирами).

Кроме этого, нередко выявляется ложная позитивация серологических реакций, не связанная с наличие у больных сифилиса и вызванная:

сопутствующими неспецифическими заболеваниями внутренних органов, нарушениями сердечнососудистой системы, ревматизмом, дисфункциями эндокринной и нервной систем, тяжелыми хроническими дерматозами, злокачественными новообразованиями;
поражениями нервной системы (тяжелые травмы, сотрясение головного мозга, психические травмы);
беременностью; хроническими интоксикациями алкоголем, никотином наркотиками; инфекционными болезнями (малярия, туберкулез, вирусный гепатит, дизентерия, сыпной, брюшной и возвратный тифы).

Указанные факторы могут оказывать влияние на иммунологическую реактивность организма как в период активного развития сифилитических проявлений, так и во время их регресса.

источник

Диагностика сифилиса основывается на клинических и лабораторных данных. Диагноз сифилиса ставят только после лабораторного подтверждения, т. е. обнаружения бледных трепонем в отделяемом твердого шанкра, эрозивных, папул при первичном и вторичном сифилисе, и данных серологического обследования. Серологические реакции являются чрезвычайно ценным методом не только для подтверждения диагноза сифилиса, но и наблюдения за динамикой его течения под влиянием лечения и определения излеченности болезни.

Стандартные компоненты комплекса серологических реакций (КСР) для констатации сифилитической инфекции в настоящее время дополняются трепонемными реакциями: РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем), РИФ (реакция иммунофлюоресценции). Реакция Вассермана (RW, РВ) основана на феномене связывания комплемента. Для ее постановки используют кардиолипиновый антиген, являющийся холестеринизированным спиртовым экстрактом из мышц бычьего сердца и обладающий сходными антигенными свойствами с бледной трепонемой.

Реакция Вассермана

Комплемент связывается комплексом (липоидный антиген и реагин испытуемой сыворотки). Для индикации образовавшегося комплекса используют гемолитическую систему (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). В группу КСР кроме реакции связывания комплемента, с,кардиолипиновым и трепонемным антигенами, включена реакция на стекле (экспресс-метод). Выраженность гемолиза при РВ обозначается плюсами: резко положительная - 4 +; положительная - 3 +; слабоположительная - 2 + или 1 +; отрицательная - . Имеет значение и постановка реакции по количественному методу, т. е. с различными разведениями »сыворотки (1:10; 1:20 и т.д. до 1:320).

Многочисленность стандартных серологических реакций объясняется антигенной мозаичностью бледных трепонем, в связи с чем в сыворотке крови больных возникает соответствующая множественность антител (комплементсвязывающие, агглютинины, преципитины, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию и др.).

В каждой стадии сифилиса могут преобладать те или иные антитела и, следовательно, реакции с одними антигенами могут быть уже положительными, а с другими - еще отрицательными. Кроме того, относительная специфичность стандартных серологических реакций вызывает необходимость во избежание диагностических ошибок пользоваться не одной из них, а комплексом реакций. КСР становятся положительными в конце 3-й или в течение 4-й недели после появления твердого шанкра. Эти реакции бывают резко положительными и в значительном разведении сывороток практически у всех больных вторичным свежим (98-99%), вторичным рецидивным (100%), третичным активным (70-80%) и третичным скрытым (50-60%) сифилисом.

Однако КСР не является строго специфичным комплексом реакций для сифилиса. Они могут оказаться положительными у больных лепрой, туберкулезом, бруцеллезом, малярией, красной волчанкой, а также при пневмонии, заболеваниях печени, онкологических болезнях, после приема алкоголя, жирной пищи, во время беременности, особенно во второй ее половине, а также в течение первых 2 недель после родов.

С возрастом количество неспецифических ложноположительных результатов КСР увеличивается. Для обоснованного диагноза сифилиса наряду с данными КСР учитываются клинические данные, результаты исследования на бледную трепонему в манифестных проявлениях первичного и вторичного сифилиса, данные других серологических реакций - РИБТ и РИФ. РИБТ основана на феномене обездвиживания бледных трепонем антителами типа иммобилизинов, имеющимися в сыворотке крови больных сифилисом. В качестве антигена для РИБТ используют взвесь бледных трепонем, полученных из тканей сифилитического орхитд.дролцка.

Бледные трепонемы после добавления к ним сыворотки крови больного прекращают движение, т. е. происходит их иммобилизация. Результаты реакции оценивают в процентах: положительная РИБТ констатируется при иммобилизации от 51 до 100% .бледных трепонем, слабоположительная - от 31 до 50%, сомнительная - от 21 до 30% и отрицательная - от 0 до» 20%. Реакцию ставят в условиях анаэробиоза. Иммобилизины появляются, в сыворотке крови больных позднее, чем другие антитела, поэтому РИБТ становится положительной позже, чем КСР и РИФ. РИБТ является наиболее специфичной из существующих реакций на сифилис. Ее основное назначение - распознавание ложноположительных результатов при постановке КСР. Это особенно важно в отношении больных, у которых сифилис протекает скрыто без наружных проявлений, но с поражением внутренних органов или нервной системы. Особенное значение имеет РИБТ при распознавании ложноположительных результатов КСР у беременных.

Следует помнить, что неспецифические положительные результаты РИБТ возможны и у больных саркоидозом, красной волчанкой, туберкулезом, циррозом печени и др. Однако при этих заболеваниях РИБТ бывает слабоположительной (от 30 до 50%) и никогда не достигает 100%. При лечении антибиотиками результаты РИБТ становятся негативными. Поэтому исследования с помощью РИБТ проводятся только через 7 дней, если вводились водорастворимые антибиотики, и через 25 дней после окончания лечения дюрантными антибиотиками. РИФ - более чувствительная реакция, поэтому она бывает положительной уже в первичном серонегативном периоде сифилиса у 80% больных. По степени специфичности РИФ уступает РИБТ, что не позволяет заменить ею РИБТ, хотя техника ее значительно проще. Реакцию ставят в нескольких модификациях: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-абс. (абсорбированная). РИФ-10 более чувствительна, а РИФ-200 и РИФ-абс. более специфичны.

Принцип реакции заключается в том, что специфический антиген (бледные трепонемы) соединяют с сывороткой крови больного (антитела) и антивидовой флюоресцирующей сывороткой (кроличья сыворотка против глобулинов человека, соединенная с флюоресцеином, - веществом, светящимся при ультрафиолетовом свете). При положительной реакции в люминесцентном микроскопе можно видеть желто-зеленое свечение бледных трепонем, поскольку они оказываются окружёнными прилепляющимися к ним флюоресцирующими антителами. Степень свечения оценивается плюсами, как и при КСР. Положительная реакция констатируется 4 +, 3 + и 2 +. При степени свечения 1 + и отсутствии свечения реакция считается отрицательной. При вторичном сифилисе РИФ положительна почти в 100% случае. Она всегда положительна при латентном сифилисе (99-100%), а при третичных формах и врожденном сифилисе положительна в 95-100%..

Экспресс-метод (микрореакция на стекле). В этой реакции, так же как и при КСР, используют кардиолипиновый антиген, одну каплю которого смешивают с 2-3 каплями сыворотки крови обследуемого человека в лунках специальной стеклянной пластины. Реакция протекает по механизму преципитации. Общая продолжительность постановки реакции 10-40 мин. Результат оценивают по кддинеству выпавшего осадка и величине хлопьев; выраженность реакции обозначают плюсами: 4 +,3 + и т.д., как и КСР. Микрореакция на стекле менее специфична для больных сифилисом, чем РВ, но несколько превосходит ее по чувствительности. Ложноположительные результаты при экспресс-методе получают чаще, чем при РВ. Поэтому этот метод разрешен для применения только как отборочная реакция при массовых обследованиях населения, диспансеризации и обследовании больных в клинико-диагностических лабораториях соматических больниц.

Окончательный диагноз сифилиса на основании этого метода устанавливать запрещено. Только экспресс-метод нельзя применять при обследовании доноров, беременных, а также для контроля после лечения больных сифилисом. Для диагностики сифилиса можно использовать и другие методы: иммуноферментный анализ (ИФА) с реакцией микропреципитации (РПМ) или реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА) с РМП (в том числе зарубежных аналогов РМП - RPR или VDRL). При проведении клинико-серологического контроля после специфического лечения (для определения эффективности терапии) допускается количественное исследование РМП (изучение титра реакции в динамике). Иммуноферментный анализ (ИФА, Elisa). Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антигеном испытуемой сыворотки крови и выявления специфического комплекса антиген-антитело с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом. Чувствительность и специфичность ИФА аналогичны РИФ.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Макромодификацию этой реакции именуют ТРНА, микромодификацию - МНА-ТР, автоматизированный вариант- АМНА-ТР. Ученые разработали отечественный диагностикум для РПГА из патогенных и культуральных бледных трепонем. Установлена высокая чувствительность и специфичность РПГА, особенно при поздних формах сифилиса. Простота постановки, низкая стоимость и высокая чувствительность РПГА дает возможность использовать ее в качестве отборочной реакции на сифилис. РПГА ставят в качественном и количественном вариантах, существуют макро- и микромодификации.

IgM-серология. В последние десятилетия широко изучается динамика образования антител в организме больных сифилисом до, в процессе и после окончания лечения. Это вызвано тем, что у пациентов, полноценно леченных по поводу сифилиса, в течение длительного времени остаются положительные результаты специфических серологических реакций на сифилис, .что усложняет решение вопроса об излеченности больных, а также постановку диагноза раннего врожденного сифилиса. Затруднена также дифференциальная диагностика рецидива заболевания и реинфекции.

При изучении антйтелообразовния в организме больных сифилисом было установлено, что первыми после заражения вырабатываются специфические. IgM, выявляемые уже на второй неделе после заражения и достигающие максимальной концентрации в крови на 6- 9 неделе. Через 6 мес. после окончания терапии у большинства больных в крови они не определяются. На четвертой неделе после инфицирования организм начинает продуцировать специфические IgG. Этот вид иммуноглобулинов в наибольшем количестве определяется через 1-2 года после заражения. Следует обратить внимание на то, что специфические IgM перестают вырабатываться при исчезновении из организма антигена, а секреции IgG продолжается клонами клеток памяти. Кроме того крупные молекулы IgM не проходят через плаценту от матери к плоду, в связи с чем по Их наличию у ребенка судят об его инфицировании бледной трепонемой. Ввиду того, что концентрация в крови специфических

IgM закономерно снижается с течением времени, рост титра этих антител может служить вспомогательным признаком наличия рецидива заболевания или реинфекции. В 1977 г. была предложена 19S IgM-ТА-абс., затем 19 IgM-TPHA. В основе этих тестов лежит разделение с помощью гель-фильтрации испытуемых сывороток крови на 19S IgM и 7S IgG и выявления первых с помощью иммунофлюресцентного метода и теста гемагглюцинации. В 1980 г. В. Шмидт описал реакцию гемадсорбции на твердофазном носителе IgM-SPHA, объединившую элементы постановки ИФА и РПГА, а в 1983 г. Е. Линдешмидт предложил IgM-TP-ABS-Elisa. А. Люгер (1981) определил, что для установления активности специфического процесса в ЦНС важно определение IgM путем постановки 19S IgM-SPHA. Особое внимание обращается на сероконверсию при сифилисе у младенцев, матери которых получали противосифилитическое лечение.

Диагноз врожденного сифилиса нередко ставится ошибочно у здоровых новорожденных на основании выявления у них IgG-AT, которые попадают в кровь ребенка через плацентарный барьер от больных сифилисом матерей. Требуется дополнительное тестирование IgM-AT и использование комбинаций различных тестов для исключения врожденного сифилиса у младенцев, рожденных от леченных от сифилиса матерей, при наличии у первых положительных серологических реакций, но отсутствии клинических симптомов.

Реакция пассивной гемагтлютинации в серодиагностике сифилиса (РПГА) в отличие от РИФ и ИФА отличается методической простотой постановки, быстротой получения результатов и высокой воспроизводимостью. Учитывая эти качества РПГА должна использоваться как скрининг-тест при массовых обследованиях на сифилис. Принцип метода заключается в том, что при взаимодействии сыворотки крови, содержащей специфические антитела, с эритроцитами, сенсибилизированными бледной трепонемой, наблюдается характерная их агглютинация. Сенсибилизация эритроцитов может производиться антигенами патогенных и культуральных штаммов бледных трепонем. РПГА является ценным диагностическим тестом на всех стадиях сифилиса, особенно чувствительна при поздних формах сифилиса.

Перед применением препаратов, указанных на сайте, проконсультируйтесь с врачом.

Когда назначают анализ крови на КСР

К таким показаниям относят:

Беспорядочные половые связи (как случайные, так и нет).Не всегда люди во время полового акта предохранятся, и поэтому риск заболеть сифилисом повышается в несколько раз.
Подготовка перед операцией, когда врачам очень важно знать об общем состоянии организма человека и о том, нужно ли предпринимать какие-то лишние меры безопасности, чтобы не заразится самим.
Беременность, во время которой очень важно провести полную диагностику организма будущей мамы и понять, насколько велики шансы выносить малыша. Да и к тому же сифилис представляет опасность для ребенка, и поэтому, в некоторых случаях это может сподвигнуть к прерыванию беременности.
Планирование беременности. Данный процесс рассчитан на то, что будущие родителями сознательно проходят обследование, чтобы подойти к вопросу зачатия серьезно. Во время этого мероприятия выявляются все возможные болезни, а также имеющиеся инфекции, которые нужно сразу же лечить.
Язвы на половых органах, которые могут свидетельствовать о наличие серьезного и опасного заболевания.
Обильные выделения из половых органов различного характера.
Увеличение лимфатических узлов, преимущественно в области паха.
Сыпь на теле, которая может сопровождаться сильным зудом.
Болезненные ощущения в области костей.

Подготовка и расшифровка анализа крови

Как правильно подготовиться для сдачи крови на анализ КСР

В тот момент, когда ученые получили такой способ диагностики сифилиса, стало возможным выявить его даже при скрытом течении.

Реакция Вассермана имеет особое значение для любого венеролога, потому что:

Позволяет определить даже момент заражения, конечно, не с точностью до дней, но примерный промежуток и срок болезни вполне.
Можно определить наличие сифилиса даже в том случае, если он протекает в скрытой форме.
Это единственный нормальный показатель того, насколько эффективно протекает лечение и есть ли положительная динамика.

Больше информации об анализе можно узнать из видео.

Также, на результаты анализа ориентируется врач во время проведения профилактических мероприятий в очаге инфекции, что тоже немаловажно. Пациенты привыкли к тому, что результат анализа может быть либо положительным, либо же отрицательным. Но с сифилисом дело обстоит немного иначе.

Отрицательный результат может быть как при полном отсутствии инфекции, так и при раннем первичном или позднем третичном сифилисе.

Что же касается положительного результата, то он говорит о том, что инфекция присутствует в организме (в зависимости от точности показателей), либо же о том, что человек находится на стадии выздоровления или же в первый год после лечения. То есть, получая результат анализа нельзя с точностью сказать о том, здоров ли человек или де нет. Особенно если речь идет о пациентах, проходящих лечение.

В том случае, если человека не мучили симптомы, и он не проходил никакого лечения, и при этом анализ его отрицательный, то это говорит о полном отсутствии болезни.

Ложноположительная реакция

Есть ряд заболеваний и причин, из-за которых анализ крови КСР может показать ложноположительный результат. Конечно, это подвергает в шок человека, но не говорит о безнадежности.

Ложноположительный результат может быть в следующих случаях:

Во время беременности, так как организм в этот момент подвергается сильной нагрузке.
При сахарном диабете.
При туберкулезе любой формы.
При наличии злокачественных опухолей в организме (онкология).
При злоупотреблении алкогольными напитками.
При вирусном гепатите, когда печень работает не так, как того требует организм.
При пневмонии, особенно в тяжелых формах ее течения.

КСР анализ крови является очень важным методом диагностики, который позволяет вовремя обнаружить болезнь и начать лечение.

Вопрос дня

Добрый день, Доктор! Нахожусь на 18 неделе беременности. Очень волнуюсь за своего малыша. Первое УЗИ делала на сроке 12 недель. .

мы понимаем Ваше волнение, но, к сожалению, УЗИ-диагностика делается только по показаниям, планово, три раза за всю беременность. У любого медицинского вмешательства есть побочные эффекты, поэтому мы не рекоменду.

СПРОСИТЕ ДОКТОРА

КСР (реакция Вассермана)

Метод распознавания сифилиса при помощи серологической реакции. Основана на свойстве кровяной сыворотки больных сифилисом образовывать с соответствующим антигеном комплекс, адсорбирующий комплемент – часть нормальной сыворотки; антигеном служат эритроциты бараньей крови, антителом – сыворотка крови человека. Если при добавлении гемолитической сыворотки не происходит растворения эритроцитов (гемолиза), реакция Вассермана считается положительной (сифилис есть), при появлении гемолиза реакция Вассермана отрицательная (сифилиса нет). Данный метод позволяет установить заболевание сифилисом при отсутствии его клинических проявлений; служит критерием эффективности лечения.

Положительная реакция Вассермана может наблюдаться и при некоторых заболеваниях несифилитического происхождения (проказа, малярия, сыпной, тиф, оспа, скарлатина, грипп, корь, вирусное воспаление лёгких и так далее), а также при некоторых физиологических состояниях (при менструации, во второй половине беременности у 2% беременных), при приёме внутрь лекарственных препаратов – ложноположительные реакции. Поэтому в случае сомнения необходимо повторное исследование.

С 2010 г. в России реакцию Вассермана полностью заменит ИФА-диагностика (иммуноферментный анализ)

С ценами на анализ крови на сифилис методом КСР (реакция Вассермана) можно ознакомиться в разделе Прейскурант.

Какие бывают анализы на сифилис?

Характеристика болезни

Выделяют первичную, вторичную, латентную и третичную стадии сифилиса. Первые признаки недуга – это язва на коже, которая исчезает примерно через 5 недель. Спустя два месяца появляются признаки вторичного сифилиса в форме сыпи, язв и узелков. Одним из тяжёлых осложнений этой формы является поражение почек. Это состояние сопровождается протеинурией – повышенным содержанием белка в тесте мочи (выше 2-3 г/л). Обычно сыпь проходит через несколько недель без лечения.

Если болезнь не лечить, развивается третичный сифилис. Он проявляется через пять лет, когда происходит разрушение внутренних органов. Поражается нервная, сердечно-сосудистая системы, спинной и головной мозг. Выходят из строя почки, печень, желудок, кишечник.

Как берут анализ

Виды исследования

Для определения антител к бледной трепонеме в крови применяются следующие тесты:

РИФ или FTA (реакция иммунофлюоресценции) – определяется реакция поглощения флюоресцирующих антител.
РПГА или TPHA (реакция пассивной гемагглютинации) – анализ на сифилис, выявляющий антитела IgM и IgG.
ИФА или ELISA – название расшифровывается как иммуноферментный анализ, определяет количественное содержание антител IgG и IgM.

Реакция пассивной гемагглютинации

Чувствительность РПГА намного эффективнее во вторичном и третичном периоде сифилиса – 99%, тогда как в первичном достоверность анализа составляет 85%.

Реакция Вассермана

Как оценить результат

Самым высоким рейтингом доверия среди больных сифилисом является результат ПЦР. Если ПЦР положительный, это значит, что он действительно положительный. Если расшифровка отрицательна, то – отрицательный. Но ПЦР способен показать положительный результат и после успешного лечения, поскольку способен определить наличие как живой, так и мертвой бактерии. Ложный результат после успешного лечения могут выдать и другие тесты.

Анонимность лечения

Вопросы

Вопрос: Анализ крови?

Здравствуйте! Помогите расшифровать результаты анализа крови из вены: ИФА 3,3 №(0-1,2). Что это обозначает?

Пожалуйста, воспроизведите дословно всю информацию с лабораторного бланка. Название анализа, единицы измерения (если есть). С этой информацией, можно будет ответить на Ваш вопрос более точно.

Анализ крови КСР. На обратной стороне листка было написано: ИФА 3,3 №(0-1,2), реакция Вассермана отрицательна.

КСР, она же - реакция Вассермана, устаревший метод лабораторной диагностики, ранее применявшийся для выявления сифилиса. Приведенный Вами результат, можно расценивать как сомнительный, однако, это ни коим образом не означает наличие возбудителя сифилиса в Вашем организме. Для уточнения ситуации, необходимо пройти обследование методом ИФА (проверить уровень антител класса М и G к сифилису). Только на основании данных этого обследования, можно будет подтвердить или исключить сифилис. Более подробно о возбудителе этого заболевания и путях его передачи, клинических проявлениях сифилиса, методах лабораторной диагностики этого заболевания, а также, о методах его лечения, Вы можете прочитать в нашем разделе, посвященном данному заболеванию: Сифилис.

Узнать больше на эту тему:

Поиск вопросов и ответов

Форма для дополнения вопроса или отзыва:

Пожалуйста воспользуйтесь поиском ответов (База содержит болееответов). На многие вопросы уже даны ответы.

Анализ кср расшифровка

Всего страниц: 3

Последнее место работы.

Добрый день, всем! Несколько лет назад было лечение сифилиса. Недавно сдала анализы, вот, что в результате: Помогите расшифровать анализ пожалуйста: anti- Treponema pallidum lg M - отриц. Anti- Treponema pallidum - полож. Суммарный lgM+lgG - КП 5.52 Титр 1: 160 Siphilis ЭДС(РМП) - отриц. Что означают эти данные? Снова надо пройти лечение? Спасибо за ответ.

ОТВЕТИЛ: 13.05.2013

Здравствуйте, Дарис! Судя по результатам анализов у Вас был первичный серопозитивный сифилис (возможно вторичный). lgG, которые у Вас положительные, относятся к антителам "памяти" и могут долгое время циркулировать в крови и оставаться положительными после успешного лечения. Имеет значение динамика снижения титра антител. Что бы её оценить надо знать результаты предыдущих анализов. Скорее всего лечение прошло успешно, а lgG могут оставаться положительными ещё долгое время. Повторюсь для окончательного заключения нужно знать динамику изменения уровня антител. С наилучшими пожеланиями.

Уточняющий вопрос

УТОЧНЯЮЩИЙ ВОПРОС 13.05.2013 Дарис, Россия

К сожалению прошлые результаты анализов мне не известны. Лечение было первичного сиф. Затем наблюдение в течении года. Каждые 3 месяца сдавала анализы. После сдачи последнего анализа после лечения, доктор сообщил, что анализы хорошие. Спустя несколько лет сдала снова анализ и вот такие результаты. Как вы думаете, стоит идти на прием? Или лечение не требуется? Или сложно сказать? Спасибо.

ОТВЕТИЛ: 13.05.2013

Скорее всего у Вас все нормально. Если это Вас беспокоит, конечно, обратитесь к дерматовенерологу! Можете просто взять выписку из медицинской карточки с результатами предыдущих анализов. Или можете подождать 3 месяца и сдать анализ повторно. Без учета динамики результатов анализов, с уверенностью можно сказать только, что у Вас сифилис был, причем более полугода назад (судя по отрицательным IgM - которые отвечают за первичный иммунный ответ). С наилучшими пожеланиями.

Уточняющий вопрос

Похожие вопросы:

Дата	Вопрос	Статус
16.07.2014	Здравствуйте, год и четыре месяца назад заболела первичным сифилисом, было 4 креста, пролечилась в квд 21 день, стал 1 крест и врач сказал что я больше не являюсь заразной и поставил на учёт ходить каждые 3 месяца, после лечения через месяц был половой акт с парнем от которого я заболела так как он сказал что тоже прошел лечение. В итоге оказалось что никакого лечения у него не было и он меня обманул. В квд появилась возможность приехать только через год сдать анализы но не было возможности дожд...
26.03.2018	Год назад у мамы была операция по удалению части кишечника в связи с плохим полипом, сейчас готовится к операции по удалению щитовидной железы, в связи с чем собиравет анализы, и вот вдруг такое: РИФ(+), ИФА(-), что это значит, что делать? Маме 74 года никогда не болела, анализы в норме, работала 20лет медецине (соответсвенно проходила медосмотры), вдовва15лет(т. Е. Половые контакты исключены)как это понимать и что делать? Спасибо
03.02.2018	Здравствуйте! В 2011 году узнала, что у меня сифилис, прошла курс лечения, Через время родила ребёнка, ребёнок здоров. В прошлом году забеременела во-второй раз, На 20 неделе прошла ещё проф- лечении, были анализы при поступлении. Рпга3+, рмп2+. Выписалась С РПГА2+, РМП отр. После рождения у ребёнка показало РПГА2+. ИФА полож. ВРАЧИ ТОЛКОМ НИЧЕГО НЕ ГОВОРЯТ, БОЛЕН РЕБЁНОК ИЛИ НЕТ. И вот нам будет 11 месяцев, будем снова ехать сдавать анализы, ребёнку, Разводят руками почему, до сих пор не почист...
09.06.2015	Добрый день, мне очень нужна ваша помощь. У меня есть эрозия, сдала анализы на вирус ВПЧ по направлению врача. Пришел ответ с такой расшифровкой 18 генотип - 1.85 Lg ВПЛ/10. 5 клеток, но в столбце рядом стоит расшифровка, если менее 3 Lg ВПЛ/10. 5, клинично малозначуще. Есть ли у меня этот вирус? И возможно после лечения его иметь деток? Спасибо.
29.04.2013	Здравствуйте! Заразился сифилисом в свои молодые годы в 1995 году. Выявили и первый раз пролечили 1997. С тех пор прошло уже почти 20 лет, вылечиться до сих пор не удается, никто внятных ответов дать не может. Кололи и екстенциллином и цефтриаксоном, еще чем то. В целом проходил лечение уже 5 раз. И одна и та же история. Анализы после лечения начинают падать, далее опять скачек вверх. И постоянно вопрос Вы опять заразились. На прошлой неделе сдал анализы после последнего лечения (проводилост 2 г...

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — . При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Антитела к бледной трепонеме IgM

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после , через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела к бледной трепонеме IgG

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Неспецифические антитела

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Ложноположительные анализы на сифилис

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

1. Нетрепонемные тесты

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления . Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, . Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с , в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации (МРП)

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

Трепонемные тесты на сифилис. Общее описание.

Чтобы достоверно диагностировать сифилис и выявить противосифилитические антитела в организме больного (в сыворотке крови или спинномозговой жидкости), используют особые технологии лабораторных исследований - так называемые серологические методы .

При проведении диагностических тестов на сифилис, применяются различные серологические реакции : агглютинации, преципитации, иммунофлюоресценции, связывания комплемента, иммуноферментный анализ и др. В основе всех этих серологических реакций лежит взаимодействие антигенов и антител .

Специфические серологические тесты называются трепонемными потому, что в этих тестах используются бледные трепонемы или их антигены, то есть антигены трепонемного происхождения. Цель трепонемных тестов - выявление специфических антител к антигенным структурам возбудителя сифилиса, то есть антител, направленные конкретно против самих бактерий T. Pallidum, а не против тканей организма, поврежденных трепонемой. Специфические противотрепонемные антитела класса IgM могут быть обнаружены уже в конце второй недели заболевания.

7. Ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Положительные результаты РВ на сифилис у лиц, не страдающих этим заболеванием, называют ложноположительными. Частота ложноположительных результатов у здоровых лиц составляет 0,2-0,25 %. Если процент неспецифических ложноположительных результатов РВ у здоровых очень мал, то при некоторых заболеваниях он может быть высоким.

Все неспецифические результаты серологических реакций можно разделить на следующие основные группы:

1. Заболевания, обусловленные наличием общих антигенов у сходных возбудителей (спирохет): возвратный тиф, фрамбезия, беджель, пинта, трепонема полости рта, лептоспиры.

2. Положительные реакции, обусловленные изменением липидного обмена и изменением в глобулинах сыворотки. К ним относятся положительные результаты у беременных, больных подагрой, нарушения липидного состава в результате отравления свинцом, фосфором, после приема натрия салицилата, дигиталиса и др. В число этих реакций следует включить и положительные реакции при некоторых инфекционных заболеваниях (сыпной тиф, малярия, пневмония, лепра, эндокардит, коллагенозы, инфаркт миокарда, сотрясение мозга, онкологические заболевания, цирроз печени и др.)

3. Технические ошибки проведения. Неправильный выбор дозы комплемента, несоблюдение условий и сроков хранения реагентов, исключение из постановки реакции контрольных образцов сывороток крови, использование загрязненных пробирок и инструментов.

8. Модификация реакции Вассермана

Имеются модификации постановки реакции Вассермана в качественном и количественном вариантах, на холоде, со спинномозговой жидкостью.

Модификация РВ на холоде оказалась более чувствительной. Особенностью методики постановки реакции Вассермана на холоде является трехфазность температурных режимов, при которых протекает связывание комплемента. Эта реакция также ставится с кардиолипиновым и трепонемным антигеном.

Кроме качественной оценки РВ, имеется метод ее количественной постановки с различными разведениями сыворотки крови (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титр реагинов определяется максимальным разведением, еще дающим резко положительный результат (4+). Количественная постановка РВ имеет значение в диагностике некоторых форм сифилиса и при контроле за эффективностью терапии.

9. Область применения

В России РСКт входит в состав комплекса стандартных серологических реакций на сифилис (КСР).

Реакцию Вассермана с трепонемным и кардиолипиновым антигеном (РСКт) применяют для

диагностики всех форм сифилиса,
контроля за эффективностью лечения,
обследования лиц, имевших половой контакт с больным сифилисом,
обследования лиц с клиническим и анамнестическим подозрением на сифилис
при профилактическом обследовании на сифилис больных психиатрических и неврологических стационаров, доноров и беременных, в том числе лиц, направляемых на искусственное прерывание беременности.

В настоящее время, приказом Министерства Здравоохранения РФ, рекомендовано заменить РСКт на более чувствительные трепонемные методы (ИФА или РПГА).

За рубежом реакция Вассермана с трепонемальным антигеном уже давно не применяется в клинической лабораторной практике и не входит в список стандартных тестов, рекомендованных Всемирной Организацией Здравоохранения.

Комплекс классических серологических реакций (КСР)

КСР - это комплекс реакций , применяемых для серодиагностики сифилиса в качестве стандартного метода. Этот комплекс реакций включает в себя реакцию Вассермана с кардиолипиновым антигеном (экстракт из сердца быка, обогащенный лецитином и холестерином) и трепонемным антигеном (обработанная ультразвуком взвесь апатогенных культуральных бледных трепонем), а также микрореакцию преципитации (РМП) с плазмой или инактивированной сывороткой, которая ставится с кардиолипиновым антигеном

КСР становятся положительными в середине первичного периода (его деление на серонегативный и серопозитивный как раз и определяется по КСР), во вторичном периоде КСР положительны у 98-100% больных, а при третичном – лишь у 60- 70%. То есть, по мере увеличения давности заболевания позитивность КСР постепенно снижается.

Достоинства КСР:

1) Дешевизна, простота и быстрота постановки. Особенно это характерно для реакции микропреципитации: РМП в настоящее время – главный скрининговый (отборочный) метод;

2) Нетрепонемные тесты удобно использовать для контроля излеченности сифилиса.

Недостатки КСР:

1) Субъективность оценки результатов реакций («на глаз»);

2) Малая чувствительность при поздних формах сифилиса;

3) Недостаточная специфичность по сравнению с более современными тестами. При их проведении часто отмечаются ложноположительные реакции (ЛПР).

ЛПР могут быть обусловлены перекрестной реактивностью между бледной спирохетой и другими микробами, нарушениями липидного и белкового обмена, нестабильностью клеточных мембран, образованием аутоантител. ЛПР отмечаются при острых (малярия, инфекционный мононуклеоз и др.) и хронических (туберкулез, лепра, гепатит, боррелиоз и др.) инфекциях, инфаркте миокарда, циррозе печени, коллагенозах (особенно – при СКВ), онкопатологии, вакцинации, употреблении наркотиков, злоупотреблении алкоголем и жирной пищей. Ложноположительными могут быть КСР в последние недели беременности, после родов, а у некоторых женщин и во время месячных. Ложноотрицательные результаты КСР могут быть связаны с ВИЧ-инфекцией.

РИТ, РИБТ - Реакция иммобилизации бледных трепонем

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ; Treponema pallidum immobilization test, TPI) - классический метод, который служит для выявления специфических трепонемных антител. Реакция РИБТ использует в качестве антигена патогенные бледные трепонемы T. pallidum (штамм Nichols), выращенные в яичке кролика. РИБТ основывается на потере подвижности живых бледных трепонем после воздействия антител из сыворотки крови пациента и комплемента. Результаты оцениваются посредством темнопольной микроскопии. Несмотря на то, что тест РИБТ был введен в клиническую практику в качестве специфического теста на сифилис, он является трудоемким, технически сложным, времязатратным и дорогим в применении.

1. История метода РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) является фактически первым специфическим тестом для диагностики сифилиса. Эта реакция была представлена в 1949 году американскими исследователями Нельсоном и Майером (R. W. Nelson и M. M. Mayer) и подробно рассмотрена в научных работах в последующие десятилетия. Безуспешные попытки использовать живые трепонемы в тестах предпринимались и раньше. Благодаря тому, что Нельсону удалось создать среду, в которой трепонемы сохраняли жизнеспособность до 8 дней, его исследования увенчались успехом.

2. Принцип метода РИБТ

Метод основан на феномене потери бледными трепонемами подвижности в присутствии иммобилизирующих противотрепонемных антител исследуемой сыворотки крови и комплемента в анаэробных условиях. Антигеном служат живые патогенные бледные трепонемы, полученные от искуственно зараженных сифилисом кроликов.

3. Постановка теста РИБТ

В реакции участвуют испытуемая сыворотка, комплемент и антиген. К живым трепонемам, полученным из тканей яичка кролика после искусственного заражения, добавляют сыворотку крови исследуемого. При наличии в сыворотке противотрепонемных антител-иммобилизинов, бледные трепонемы прекращают движение (иммобилизируются). Антитела-иммобилизины относятся к поздним антитрепонемным антителам.

Реакция ставится с инактивированными прогреванием сыворотками или с образцами сывороток, высушенных на вощеной бумаге (сухие капли). Инактивацию сыворотки прогреванием проводят 30 минут при температуре 56°С. Перед взятием крови обследуемый не должен получать медикаменты, особенно препараты пенициллина. Прием препаратов отменяют на срок их возможной задержки в организме.

В качестве антигена используются бактерии штамма Никольса, полученные из 7–10-дневного кроличьего сифилитического орхита (воспаления яичка). Период от момента постановки реакции до регистрации ее результатов длится 18-20 часов, поэтому для сохранения жизнеспособности и хорошей подвижности микроорганизмов необходима среда выживания.

В РИБТ применяют комплемент морских свинок. Для получения комплемента кровь берут обязательно в условиях стерильности у нескольких морских свинок.

В случае бактериального загрязнения комплемент бракуют. Нельзя применять в реакции иммобилизации бледных трепонем консервированный комплемент, т.к. он токсичен для микроорганизмов.

В реакции иммобилизации используют избыток комплемента. Количество его в значительной степени зависит от среды выживания для бледных трепонем.

РИБТ ставят в стерильных боксах, предварительно облученных бактерицидной кварцевой лампой в течение 45-60 минут. Каждую сыворотку крови исследуют в двух пробирках: опытной и контрольной . В обе пробирки вносят исследуемую сыворотку и антиген в необходимых количествах. В опытную пробирку наливают активный комплемент, а в контрольную такое же количество инактивированной сыворотки крови морской свинки. После заполнения содержимое пробирок перемешивают легким встряхиванием.

РИБТ протекает в анаэробных условиях. Пробирки с ингредиентами помещают в микроанаэростат, из которого вакуумным насосом отсасывается атмосферный воздух и нагнетается газовая смесь из баллона (95 частей азота и 5 частей углекислого газа). Микроанаэростат с пробирками помещают в термостат (35°С) на 18-20 часов.

Оценку результатов РИБТ производят после извлечения пробирок из термостата и микроанаэростата (т.е. через 18-20 часов опыта). Пастеровской пипеткой на предметное стекло наносят каплю содержимого пробирки, которую накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле микроскопа (объектив 40, окуляр 10X). Просматривают несколько полей зрения в разных участках препарата, подсчитывая в каждом число подвижных и неподвижных бледных трепонем. Подсчет начинают с препарата из контрольной, а затем из опытной пробирки.

При постановке реакции применяют 5 контрольных исследований: с заведомо положительной и отрицательной сыворотками крови, с активным и инактивированным комплементом и средой выживания для бледных трепонем. Контрольную отрицательную сыворотку крови применяют для суждения о степени подвижности бледных трепонем в данном опыте. Контрольную положительную сыворотку крови - для оценки степени иммобилизирующей активности в условиях данного опыта. Исследование активного и инактивированного комплемента и среды проводят для определения их влияния на подвижность бледных трепонем.

При недостатке комплемента в опыте, иммобилизирующие антитела не проявляют свою активность должным образом и трепонемы остаются подвижными. Поэтому, после опыта проводят определение остаточного комплемента, чтобы оценить, не была ли подвижность бледных трепонем в опытных пробирках обусловлена отсутствием комплемента. Для этого применяется гемолитическая система - выдержанная в термостате смесь из взвеси эритроцитов барана и разведённой гемолитической сыворотки.

Остаточный комплемент определяют добавлением в каждую пробирку гемолитической системы в нужном объеме. Пробирки помещают в термостат при 37° на 45 минут. В опытных пробирках должен наступить гемолиз эритроцитов, в контрольных должна быть задержка гемолиза. Отсутствие в опытных пробирках гемолиза указывает на недостаточное количество комплемента, в этих случаях исследование надо повторить. Повторное исследование сыворотки крови не производят только в том случае, если отмечена 100% иммобилизация бледных трепонем.

4. Учет результатов РИБТ

Подсчет утративших подвижность, иммобилизованных трепонем ведется под микроскопом, методом темнопольной микроскопии. От исследователя требуется навык оценки движения трепонем. Ему следует обращать внимание на интенсивность движений, совершаемых бледной трепонемой. У этой бактерии не всегда можно наблюдать волнообразные сокращения и сгибательные движения, иногда только вращательные. Следует также уметь отличать активные движения трепонем от движения с током жидкости.

Для оценки результатов реакции рассчитывается процент иммобилизации бледных трепонем, т. е. соотношение подвижных и неподвижных трепонем в опыте (с активным комплементом) и контроле (с неактивным комплементом) по формуле:

X = (М – С)×100/М

где М - количество подвижных трепонем в контроле; С - количество подвижных трепонем в опыте; X - % иммобилизации. В практической работе процент иммобилизации определяют по заранее составленной таблице с применением вышеуказанной формулы.

Реакция иммобилизации бледных трепонем оценивается как

положительная при иммобилизации 51 - 100% трепонем,
слабоположительная: 31 - 50% неподвижных трепонем,
сомнительная: 21 - 30% неподвижных трепонем,
отрицательная: 0 - 20% неподвижных трепонем.

Реакция иммобилизации бледных трепонем становится положительной в конце первичного – начале вторичного периода сифилиса (с 7-8-й недели от момента заражения и более). Вместе с тем РИБТ малопригодна для диагностики ранних стадий сифилиса, поскольку антитела, иммобилизирующие бледные трепонемы и определяемые в реакции, появляются только через 3-6 недель после заражения. Антитела-иммобилизины относятся к классу иммуноглобулинов IgG. Они появляются в крови позже реагинов (антикардиолипиновых антител), позже антител-флюоресцинов (выявляются РИФ и ИФА) и преципитинов (выявляются РМП).

В дальнейшем РИБТ остается положительной. Отмечается высокая чувствительность реакции при поздних формах сифилиса. При вторичном, позднем сифилисе, нейросифилисе, врожденном сифилисе положительный результат РИБТ регистрируется в 95–100 % случаев. При третичном сифилисе, при специфических поражениях внутренних органов, нервной системы, когда РВ часто отрицательная, РИБТ дает положительные результаты в 98 - 100% случаев.

РИБТ долгое время признавалась самым специфичным тестом на сифилис. По данным литературы, специфичность РИБТ равна 99 %, чувствительность колеблется от 79 до 94 %. По данным ЦНИКВИ, чувствительность РИБТ (суммарно, по всем стадиям сифилиса) составляет 87,7%.

7. Область применения метода

Сфера применения РИБТ постепенно сужается из-за длительности постановки, дороговизны и трудоемкости. РИБТ - это достаточно сложный и затратный анализ, требующий высокой квалификации персонала и наличия вивария. В связи с этим применение данного метода в последние годы существенно сократилось. В США этот тест в настоящее время применяется только в исследовательских лабораториях.

Исходя из сложности и дороговизны РИФ и РИБТ, имеет смысл применять их для диагностики поздних и скрытых форм сифилиса. РИБТ сохраняет свои позиции как «реакция-арбитр» при дифференциальной диагностике ранних скрытых форм сифилиса и ложноположительных результатов. Эта реакция может быть полезн при диагностике нейросифилиса и при расхождении результатов других серологических тестов.

РИБТ становится положительной значительно позже, чем РИФ и РВ. Поэтому для диагностики заразных форм сифилиса она не применяется.

РИБТ, как и РИФ, очень медленно негативируется в процессе противосифилитической терапии. Вследствие этого она непригодна для контроля за ходом противосифилитической терапии.

Ложноположительные результаты (ЛПР) при РИБТ редки и отмечены главным образом при ряде трепонематозов (фрамбезия, пинта, беджель), не встречающихся в России, а также при лепре, саркоидозе, СКВ, туберкулезе, циррозе печени и некоторых других редких заболеваниях несифилитической природы. С возрастом пациентов число ложноположительных результатов РИБТ увеличивается.

РИБТ может оказаться ложноположительной, если в исследуемой сыворотке содержатся трепонемоцидные вещества (например, пенициллины, тетрациклины, эритромицин), вызывающие неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем, Это может быть следствием приема трепонемоцидных антибиотиков пациентом, поэтому обследование не проводят лицам, получавшим антибиотики в течение последнего месяца. Кровь на РИБТ можно исследовать не ранее 2 недель после окончания приема антибиотиков и других противосифилитических препаратов.

9. Модификации реакции иммобилизации бледных трепонем

Помимо микроанаэростатной методики существует меланжерная постановка РИБТ по Н.М. Овчинникову. Анаэробные условия при постановке реакции создаются помещением реагирующей смеси в меланжер (лейкоцитарный смеситель), оба конца которого закрыты резиновым кольцом. Меланжерная методика реакции позволяет обходиться без вакуумного насоса, баллона со смесью азота и углекислого газа, микроанаэростата. При сравнительном изучении на большом клиническом материале получены результаты, не уступающие классической анаэростатной методике.

10. Особенности, преимущества и недостатки РИБТ

РИБТ - это технически сложный и дорогостоящий метод диагностики. Технология требует значительных средств для содержания кроликов и проведения тестирования. Этот трудоемкий тест в настоящее время он применяется в основном для научных целей. В большинстве зарубежных стран уже почти 40 лет РИБТ практически используется не для диагностических целей, а только в научно-исследовательской работе.

Недостатки реакции:

РИБТ требует работы с живыми патогенными бледными трепонемами штамма Никольс, остающегося заразным для человека несмотря на адаптацию для кроликов
постановка реакции сложна, трудоемка и дорогостояща
необходимо наличия вивария
требуется высококвалифицированный персонал для постановки реакции, учета результатов и содержания вивария
субъективность оценки результатов
отсутствие автоматизации
нет возможности стандартизировать этот серологический метод.
реакция неприменима на фоне проводимой антисифилитической терапии
невозможность использовать для контроля излеченности. РИБТ у больных сифилисом может оставаться положительной в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение.
реакция может давать ложноположительные результаты у больных злокачественными опухолями, диабетом, лепрой, аутоиммунными заболеваниями, пневмонией, тяжелой сердечно-сосудистой патологией.

Достоинствами РИБТ являются:

1) Достаточно высокая чувствительность;

2) Высокая специфичность.

РИФ (Реакция иммунофлюоресценции)

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - метод экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. Тесты, основанные на детекции флюоресцентного сигнала, считаются одними из лучших тестов на сифилис.

1. История метода

Трепонемный флюоресцентный тест - реакция иммунофлюоресценции - РИФ (Fluorescent treponemal antibody, FTA) был впервые разработан в 1957 г. Deacon и соавторами (Deacon, Falcone and Harris).

2. Принцип метода

Метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета

В качестве антигена в РИФ используется взвесь живых патогенных бледных трепонем штамма Никольс из орхита кролика, которая высушивается на предметном стекле и фиксируется ацетоном. К высушенным и фиксированным ацетоном к стеклу бледным трепонемам добавляется сыворотка крови больного.

После промывания препарат обрабатывается сывороткой, содержащей антитела против иммуноглобулинов человека, меченные флюоресцином. Еще раз промывают препарат и смотрят его под люминесцентным микроскопом. Если в исследуемой сыворотке есть противотрепонемные антитела-флюоресцины, будет отмечаться желто-зеленое свечение трепонем.

3. Способ проведения исследований методом РИФ

Фиксированный на предметном стекле антиген (патогенные бледные трепонемы) обрабатывается испытуемой сывороткой. После промывания препарат обрабатывается люминесцентной сывороткой против иммуноглобулинов человека, меченной флюорохромом. При этом образующийся флюоресцирующий комплекс (античеловеческий глобулин + флюоресцеин тиоизоционат) связывается с человеческим глобулином на поверхности бледной трепонемы, обеспечивая свечение бледной трепонемы под люминесцентным микроскопом.

Для выявления комплексов антиген-антитело применяют люминесцирующую сыворотку, представляющую конъюгированные с ФИТЦ антивидовые (противочеловеческие) иммуноглобулины. Наличие в сыворотке антител к трепонемам определяют по свечению трепонем при исследовании в люминесцентном микроскопе. Тест проводят в качественном и полуколичественном вариантах.

4. Учет результатов

Визуализация результатов РИФ проводится с помощью люминесцентного микроскопа. Результаты оцениваются по степени свечения трепонем в препарате. При наличии антител видно свечение трепонем, если же в сыворотке не было противотрепонемных антител, то трепонемы не видны. Степень свечения фиксированных к стеклу высушенных бледных трепонем обозначаются в «плюсах» (от «–» до «++++»). Отрицательный результат - отсутствие свечения или уровень фона - 1+.

5. При каких периодах заболевания лучше использовать

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) достаточно чувствительна на всех стадиях инфекции, с окончания периода инкубации до позднего сифилиса. Первичный период сифилиса при классическом течении начинается через 3-4 недели после заражения. РИФ становится положительной в первые дни первичного периода или даже в конце инкубационного периода, с 3-й недели после инфицирования. Результаты РИФ остаются положительными во всех периодах, в том числе при поздних формах.

РИФ становится положительной несколько раньше, чем РВ. По некоторым данным, положительная РИФ бывает у 80% больных первичным серонегативным сифилисом. Во вторичном периоде РИФ положительная почти в 100% случаев. Она всегда положительная при латентном сифилисе и дает 95 - 100% положительных результатов при поздних формах заболевания и врожденном сифилисе.

6. Чувствительность и специфичность

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – это группа методов, обладающих высокой чувствительностью и специфичностью. РИФ чувствительна во всех стадиях инфекции, начиная от периода инкубации и заканчивая поздним сифилисом. По данным ВОЗ, чувствительность РИФ при первичном сифилисе – 70-100%, при вторичном и позднем – 96–100%, специфичность – 94–100%. По данным ЦНИКВИ, чувствительность РИФ при всех формах сифилиса составляет 99,1%.

Специфичность РИФ может быть повышена путем предварительной обработки исследуемой сыворотки сорбентом - ультраозвученным трепонемным антигеном, связывающим групповые антитела (РИФ-абс).

7. Область применения метода

РИФ применяется:

как подтверждающая реакция при раннем, скрытом сифилисе
при установлении ретроспективного диагноза
для дифференциации скрытых форм сифилиса и ложноположительных результатов исследований на сифилис.
как подтверждающий тест при нейросифилисе.

РИФ достаточно широко используют в качестве подтверждающего теста, но она не предназначена для рутинного использования или скрининга, поскольку в техническом отношении трудна для постановки. Для выполнения РИФ необходимо наличие вивария или приобретение взвеси патогенных бледных трепонем, что ограничивает возможности реакции. Однако в последние годы на отечественном рынке начали появляться тест-системы, позволяющие проводить реакцию при отсутствии вивария и собственного лабораторного штамма патогенных бледных трепонем.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

ЛПР при постановке РИФ бывают редко (при коллагенозах, боррелиозе).

РИФ до сих пор считают одним из лучших тестов на сифилис, «золотым стандартом» серодиагностики. РИФ в сравнении с РИБТ более проста в постановке,

Несмотря на высокую диагностическую ценность, широкому внедрению РИФ в повседневную практику препятствуют необходимость использования живой T. pallidum, высокая стоимость и длительность проведения исследования. Постановка реакции трудоемка. Кроме того, оценка результатов РИФ носит субъективный характер.

Достоинствами РИФ и РИБТ являются:

1) Высокая чувствительность (особенно для РИФ);

2) Высокая специфичность (особенно для РИБТ).

Недостатки РИФ и РИБТ:

1) Техническая сложность, дороговизна методов.

2) Субъективность оценки результатов, отсутствие автоматизации;

3) РИФ и РИБТ у больных сифилисом могут оставаться положительными в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение. Поэтому эти реакции невозможно использовать для контроля излеченности.

10. Модификации метода

На практике для серодиагностики сифилиса используется и использовалось несколько модификаций реакции иммунофлюоресценции:

РИФ-абс – наиболее чувствительный метод серодиагностики сифилиса, становится позитивным раньше других реакций (с 3-ей недели от заражения);
РИФ-200 (сыворотка пациента при постановке разводится в 200 раз) – высоко специфичный метод серодиагностики сифилиса.
РИФ-10 (разведение испытуемой сыворотке в 10 раз) - более чувствительный метод, чем РИФ-200.
РИФ-ц проводят с ликвором.
РИФ-абс-IgM - выявление ранних противотрепонемных антител класса IgM.

1. Наибольшее распространение получила модификация РИФ-абс - реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией. Перед постановкой реакции сыворотка обследуемого истощается смесью непатогенных трепонем для исключения перекрестных реакций. Групповые антитела удаляются из исследуемой сыворотки с помощью разрушенных ультразвуком культуральных трепонем, что существенно повышает специфичность реакции. Поскольку исследуемая сыворотка используется в разведении 1:5, то РИФ-абс отличается высокой чувствительностью.

Основными показаниями для использования РИФ-абс в клинической практике являются:

диагностика скрытых и поздних форм сифилиса,
выявление ложноположительных результатов КСР и РМП, особенно у беременных и соматических больных при подозрении на сифилис,
для установления ретроспективного диагноза заболевания.

РИФ-абс мало информативна при оценке результатов лечения: у 85 % больных, получивших адекватную противосифилитическую терапию, положительные результаты РИФ сохраняются многие годы.

Эту реакцию называют «золотым стандартом» серодиагностики сифилиса. Ее используют для арбитражных случаев, но для достоверного результата необходима свежая концентрированная взвесь T. pallidum штамма Nichols из семидневного орхита у кролика, которую нельзя замораживать.

2. В СССР ставилась в двух модификациях - РИФ-10 и РИФ-200 , т. е. с разведением испытуемой сыворотки в 10 и 200 раз. РИФ-200 - исследуемая сыворотка разводится в 200 раз для уменьшения количества ложноположительных результатов. Это обеспечивает высокую специфичность реакции, но чувствительность ее несколько падает. РИФ-10 более чувствительна, но чаще дает неспецифические положительные результаты, чем РИФ-200, отличающаяся высокой специфичностью. РИФ-10 более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс – более специфичны.

Чувствительность РИФ-200 и РИФ-абс оценивается 84–99 %, а специфичность - 97–99 %.

3. РИФ-ц проводят с ликвором. Реакция ставится с использованием цельной спинномозговой жидкости для выявления специфических поражений ЦНС.

4. Реакция РИФ-абс-IgM предложена для выявления ранних противотрепонемных антител класса IgM. Эта реакция может использоваться для диагностики врожденного сифилиса, ранних форм сифилиса и дифференциальной диагностики случаев реинфекции и серорецидива.

Известны 2 модификации этой реакции:

– FTA-ABS-IgM, основанная на использовании во второй фазе реакции конъюгата анти-IgM (меченные флюоресцеином антитела к IgM человека) вместо античеловеческого флюоресцирующего глобулина;

– российский вариант РИФ-абс-IgM, отличающийся тем, что к исследуемой сыворотке крови добавляется сорбент, удаляющий IgG-антитела, а с оставшимися IgM-антителами ставится РИФ-абс.

Основными показаниями к постановке РИФ-абс-IgM являются:

– серодиагностика врожденного сифилиса при отсутствии у ребенка манифестных проявлений врожденного сифилиса на коже и слизистых оболочках;

– дифференциальная диагностика реинфекции и клинико-серологического или серологического рецидива сифилиса, при котором РИФ-абс-IgM будет отрицательной, а РИФ-абс - положительной;

– оценка эффективности терапии раннего приобретенного или врожденного сифилиса: после адекватного лечения РИФ-абс-IgM становится отрицательной в течение ближайших 3–6 месяцев.

Эта реакция может использоваться для выявления врожденного сифилиса. Известно, что крупные молекулы IgM не могут проходить через здоровую плаценту. Следовательно, антитела класса М против бледной трепонемы могут появиться в организме ребенка или вследствие нарушения барьерной функции плаценты или же они вырабатываются организмом ребенка, больного сифилисом. Антитела класса IgM появляются в крови больного сифилисом уже в первые недели болезни, а антитела класса IgG появляются позже. Раздельное определение антител обоих классов оказывается исключительно полезным при диагностике врожденного сифилиса у детей, так как наличие у ребенка на первом месяце жизни антител класса IgM будет указывать, что они образованы организмом больного сифилисом ребенка, в то время как выявление только антител IgG будет говорить о материнском происхождении последних.

Постановка реакции 19S(IgM)-РИФ-абс предполагает предварительное разделение c помощью гель-фильтрации более крупных молекул 19S IgM от

фракции более мелких молекул 7S IgG. Дальнейшее исследование в реакции РИФ-абс сыворотки крови, содержащей только фракцию 19S IgM,

устраняет все возможные источники ошибок. Но техника постановки этой реакции сложная и трудоемкая, требует специального оборудования и подготовки специалистов.

Реакция иммунного прилипания (РИП, TPIA - Treponema pallida immunoadherence).

Эта реакция основана на использовании феномена, который в 1912 г. описал Rieckenberg. РИП основана на том, что вирулентные тканевые трепонемы, сенсибилизированные сывороткой больного сифилисом, в присутствии комплемента и эритроцитов прилипают к поверхности эритроцитов и при центрифугировании увлекаются с ними в осадок, исчезая из надосадочной жидкости.

Для постановки реакции используются следующие ингредиенты: испытуемая сыворотка, антиген, комплемент, эритроциты донора, изотонический раствор натрия хлорида. В качестве антигена используют взвесь бледных трепонем штамма Никольса.

Наиболее широко применительно к серодиагностике сифилиса этот тест изучался отечественными и зарубежными авторами в 50-60-е годы. Данные о ценности РИП как диагностического теста были противоречивы. Реакция требовала максимальной точности, так как при неточном разливе ингредиентов, при избытке или недостатке исследуемого материала в препарате получались недостоверные результаты.

В России обширные исследования провела Л.В. Сазонова, которая получила близкие результаты в РИП и РИТ при использовании свежеприготовленной взвеси патогенных бледных трепонем штамма Никольса. Однако применение прогретого или консервированного фенолом антигена резко искажало результаты реакции и делало антиген нестабильным. Рекомендовать данный тест для замены РИТ Л.В. Сазонова сочла невозможным.

Г.П. Авдеева, применив при изготовлении антигена другие температурный и временной режимы, получила при изучении РИП иные результаты. По ее данным, чувствительность этой реакции выше чувствительности KCP и РИТ, но несколько уступает РИФ, а специфичность РИП, РИТ и РИФ близка.

Однако отсутствие производственного выпуска антигена для РИП не позволило более широко изучить этот тест и внедрить его в практику.

РПГА-реакция пассивной гемагглютинации

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) является распространенным серологическим тестом, прочно укоренившимся в лабораторной практике. обладает достаточно высоким уровнем эффективности при исследовании.

1. История метода РПГА

Впервые о применении РПГА для диагностики сифилиса сообщили G.Blumental и W.Bachman (1932). В 1965 г, для диагностики сифилиса была предложена реакция непрямой, или пассивной, гемагглютинации. О модификации реакции с использованием различных антигенов сообщалось Ratlev Т. в 1965 - 1967 гг. Микромодификацию РПГА предложили Сох Р.М. и соавторы в 1969 году. Первую коммерческую тест-систему разработали японские ученые Tomisava et. al. в 1969 г.

2. Принцип метода РПГА

Из подготовленной однородной взвеси эритроцитов, «нагруженных» антигенами, при добавлении исследуемой сыворотки, содержащей антитела, выпадает осадок в виде хлопьев. Полученный осадок состоит из эритроцитов, "склеенных" антителами, и называется «гемагглютинат» . Взвесь эритроцитов подготавливается заранее и поставляется в составе диагностических тест-систем.

Процесс склеивания эритроцитов, на поверхности которых присутствуют антигены, называется «гемагглютинация». Склеивание происходит под действием специфических антител (агглютининов). Реакция называется «пассивной» , т.к. собственные антигены эритроцитов не вступают в реакцию, а сами эритроциты выполняют исключительно вспомогательную индикаторную функцию.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации - это разновидность реакции агглютинации, в которой в качестве носителей антигенов используются именно эритроциты (от греч. háima - кровь), а не другие частицы. В общем случае, в реакции агглютинации под действием антител происходит склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток - не обязательно эритроцитов, а, например частиц латекса, бактерий или других антигеннесущих корпускулярных частиц.

При реакции пассивной гемагглютинации для диагностики сифилиса, в качестве антигена используются эритроциты барана или птиц, покрытые антигенами бледных трепонем. При добавлении сыворотки, содержащей специфические антитела, происходит склеивание эритроцитов (агглютинация).

Реакцию РПГА относят к иммунологическим методам, т.к. она основана на специфическом взаимодействии антигена патогенной бледной трепонемы с антителом. В соответствии с «теорие решетки» агглютинация является результатом «сшивки» поверхностных молекул антигена молекулами антител (иммуноглобулинов).

3. Постановка реакции пассивной гемагглютинации

РПГА ставят в пластиковых планшетах или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум.

Процесс соединения антигена с эритроцитами называют сенсибилизацией, а полученный таким образом искусственный корпускулярный антиген - сенсибилизированными эритроцитами. Эритроцитарными диагностикумами называются эритроциты, сенсибилизированные антигеном.

Для приготовления диагностикума применяют обработанные вначале формалином, затем танином эритроциты барана или птиц (чаще куриные), которые подвергают сенсибилизации ультра-озвученным антигеном патогенной бледной трепонемы (штамм Никольса) или рекомбинантными белками бледной трепонемы (TpN15, TpN17, TpN47). Также могут использоваться эритроциты барана, сенсибилизированных ультраозвученным антигеном культуральных бледных трепонем.

Исследуется только сыворотка (не использовать плазму крови) . Не подходят гемолизированные и мутные образцы. Отрицательным контролем служат несенсибилизированные эритроциты (для исключения наличия антиэритроцитарных антител). В каждой серии постановок используют положительный и отрицательный контроль.

В лунки (ячейки) иммунологического планшета вносят образцы исследуемой сыворотки крови и тест-эритроциты. Если в сыворотке крови пациента содержатся специфические противотрепонемные антитела, то при добавлении исследуемой сыворотки в лунку с антигеном происходит образование комплексов "антиген-антитело", связанных с поверхностью носителей (эритроцитов). Визуально это проявляется склеиванием эритроцитов, т. е. гемагглютинацией, которая видна невооруженным глазом. Иммунные комплексы "антитело-антиген-эритроцит", которые под действием сил тяжести постепенно опускаются вниз, распределяются по всей поверхности дна лунки и формируют характерную картину «перевернутого зонтика».

В зависимости от количества антител, содержащихся в исследуемом образце, изображение «перевернутого зонтика» варьируется от максимального, занимающего всю поверхность дна лунки, до небольшого участка в центральной, самой низко расположенной его части (с просветлением в центре и формированием более интенсивного кольца из осевших эритроцитов по периферии).

Иммунные комплексы не образуются, если в образце нет специфических антител или при добавлении в реакцию контрольных (интактных) эритроцитов. При этом, эритроциты постепенно собираются в самой нижней точке дна лунки, формируя фигуру в виде компактного пятна или «пуговки», иногда с незначительным просветлением в центре.

Если сыворотка крови человека содержит антиэритроцитарные антитела, то «зонтик» сформируется в любом случае - как в реакции с тест-эритроцитами, так и с контрольными эритроцитами. В этом случае для выявления специфических антитрепонемных антител рекомендуют применять другие медицинские технологии.

Возможен феномен прозоны (невозможность реакции из-за избытка антител), устраняемый разведением сыворотки.

4. Учет результатов реакции пассивной гемагглютинации

Результаты РПГА учитывают визуально через 60-120 минут при постановке микрометода и через 2–4 ч или на следующий день при постановке макроварианта. При использовании более крупных (ядросодержащих) эритроцитов птиц получают более четкую картину, учет результатов проводят в более ранние сроки.

Возможно определение титра (высокий титр РПГА ≥ 1:2 560).

Результаты исследования оцениваются по 4+ системе (от «–» до «++++») по величине образовавшейся пленочки. При появлении агглютинации эритроциты располагаются на поверхности лунки в виде «зонтика», а при отрицательном результате эритроциты свободно соскальзывают вниз и скапливаются на дне в центре лунки в виде «пуговки».

Общепринятая оценка результатов РПГА:

4+ - положительная РПГА. Агглютинированные эритроциты в виде «зонтика» равномерно выстилают всю поверхность лунки;

3+ - положительная РПГА. Эритроциты выстилают всю поверхность лунки, но часть их «соскальзывает» к центру. При этом по периферии осадка формируется заметное кольцо;

2+ - слабоположительная РПГА. Эритроциты образуют пленку на небольшом участке нижней части лунки, формируя плотное кольцо из осадка эритроцитов с заметным просветлением в центре;

1+ - неопределенная РПГА, эритроциты образуют рыхлый осадок на дне лунки с нечеткими краями и незначительным просветом в центре;

(–) - отрицательная РПГА, все эритроциты лежат на дне лунки в виде компактного осадка («пуговки» или колечка) на чистом окружающем фоне (без окружающего зернистогоосаждения).

В зарубежной практике результаты РПГА также оценивают как реактивные (в случае образования агглютината), слабореактивные (если образования незначительны) и нереактивные (если не наблюдается агглютинации).

Учет результатов реакции может производиться автоматически с применением специальных анализаторов. Помимо качественного исследования, во всех тест-системах предусмотрен количественный анализ с определением титра.

5. При каких периодах заболевания лучше использовать РПГА

РПГА становится положительной в середине первичного периода (7-8 недель от момента заражения, через 3–4 недели после появления твердого шанкра) и после лечения годами сохраняется положительной.

При очень высоком уровне антител к трепонеме в исследуемой сыворотке (что наиболее характерно для вторичного сифилиса) возможен ложноотрицательный результат РПГА (так называемый феномен «прозоны»).

Специфические антитела-агглютинины выявляются в крови переболевших сифилисом людей в течение длительного времени, поэтому РПГА не может быть рекомендована для дифференциальной диагностики реинфекции или определения остроты инфекционного процесса.

РПГА не применяется для контроля излеченности, т.к. может оставаться положительной спустя много лет после выздоровления. Вместе с тем ее можно использовать как дополнительный (к РМП или к RPR) метод при контроле эффективности проведенного лечения, исследуя динамику снижения титров антител. Обязательным условием при этом является использование той же РПГА тест-системы, что и при первом (до лечения) обследовании пациента, а также проведение исследования в той же лаборатории.

6. Чувствительность и специфичность РПГА

РПГА считается высокочувствительным и специфичным тестом. Эта реакция является ценным диагностическим тестом при всех формах сифилиса, но особенно чувствительна она при поздних формах заболевания. В зависимости от стадии заболевания чувствительность РПГА колеблется. При первичном сифилисе чувствительность РПГА составляет 76% (и выше), при вторичном сифилисе – до 100%. При скрытом раннем - 97 %, при позднем сифилисе - 94 %, со специфичностью 98–100%. Более низкая чувствительность при свежих формах заболевания объясняется более поздним формированием агглютининов.

По данным ГУ «ЦНИКВИ Росздрава» чувствительность РПГА при диагностике различных форм сифилиса составила 99,4%. Большинство исследователей отмечают 98-99% специфичность РПГА.

По чувствительности и специфичности РПГА не уступает, а при поздних формах и врожденном сифилисе даже превосходит РИФ и РИБТ.

7. Область применения метода РПГА

РПГА может применяться в качестве как скринингового, так и подтверждающего теста; может быть использована в полуколичественном варианте с расчетом титра антител. Разработаны количественный метод постановки РПГА, микрометод, а также автоматизированная реакция микрогемагглютинации.

8. Особенности, преимущества и недостатки РПГА

По данным литературы, РПГА стабильно заняла лидирующее место в клинической практике в большинстве стран мира. РПГА –  наиболее  широко  используемый  тест  в  клиниках ИППП за  рубежом. 

Методика РПГА проста в выполнении, не требует специального оборудования: для ее постановки нужен лишь планшет для гемагглютинации. Исследование не занимает длительного времени; реакция высоко чувствительна и специфична. Апробация метода в клинической практике показала, что он является исключительно простым, дешевым и чувствительным. Как и ИФА, РПГА проста в исполнении, не требует высокой квалификации персонала и специального оборудования, возможна ее автоматизация.

Преимущества РПГА-теста:

простой в постановке и интерпретации, 
не требует специального оборудования, 
время получения результата – 45 минут, 
пригоден для массового скрининга (необходимо всего 25 мкл сыворотки в разведении 1:20), 
высокая степень стандартизации, 
наличие внутренних контролей, 
большой срок годности, 
приемлемая цена 
возможность автоматизации учета.

Следует отметить также недостатки РПГА: 

возможность неспецифических реакций при наличии антиэритроцитарных антител, 
отсутствие корреляции титра и стадии сифилиса,
 более поздняя позитивация реакции на ранних стадиях сифилиса, 
возможность ложноположительных реакций у лиц, принимавших алкоголь, наркоманов, 
чувствительность к вибрации и температуре в лаборатории.

Преимуществами РПГА по сравнению с РИБТ и РИФ являются:

использование промышленных тест-систем,
возможность автоматизации реакции,
нет необходимости работать с живой бледной трепонемой,
отпадает потребность в виварии.

9. Источники и причины ошибок при постановке РПГА, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Реакция пассивной гемагглютинации является относительно несложным исследованием; при ее выполнении необходимо соблюдать все рекомендации производителей диагностикума и правила работы в клинико-диагностической лаборатории. Допущенные ошибки могут приводить к появлению и регистрации как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов реакции. Ложноположительные результаты РПГА могут быть обусловлены влиянием человеческого фактора и факторов биологической природы.

Ложноположительные результаты могут быть получены

при исследовании сывороток крови пациентов с невенерическими трепонематозами,
за счет ревматоидного фактора
за счет перекрестно реагирующих с трепонемным антигеном антител, образующихся при различных системных или индуцированных лекарствами и наркотиками нарушениях обмена,
из-за аномального уровня иммуноглобулинов;
у новорожденных детей - за счет образования в организме плода или ребенка IgM-антител к IgG матери, что осложняет трактовку результатов и диагностику врожденного сифилиса.

Ошибки, вызванные влиянием фактора участия человека на исследование:

загрязненные микропланшеты
неправильное пипетирование
наличие вибрации в лаборатории
температура воздуха в лаборатории выходит за диапазон температуры: 18–25 градусов

К наиболее типичным техническим ошибкам при постановке РПГА, приводящим к получению недостоверных результатов, следует отнести:

неточное разведение ингредиентов,
нарушение температурного режима,
нарушение времени инкубации реагентов,
нарушение сроков нанесения реагентов на планшет,
несоответствие рН растворов требуемым,
загрязнение лабораторной посуды.

Источником ошибок при постановке РПГА могут являться и следующие технические моменты:

исключение из постановки реакции контрольных сывороток крови;
неравномерная концентрация эритроцитов в диагностикуме вследствие недостаточного его перемешивания перед использованием;
нарушение сроков и условий хранения диагностикума и контрольных эритроцитов; использование наборов с истекшим сроком годности;
использование при постановке реакций загрязненных пробирок, наконечников пипеточных дозаторов, пипеток, иммунологических планшетов, растворов;
неточности при первичном разведении образца сыворотки крови;
недостаточная тщательность выполнения последовательных двукратных разведений;
несоблюдение температурного режима и времени инкубации;
наличие посторонних вибраций и встряхиваний иммунологического планшета во время инкубации;
нарушение методики постановки РПГА, выражающееся в отказе от выполнения исследования с контрольными эритроцитами.

Применение плазмы крови, содержащей антикоагулянты, способные вызывать неспецифическую агглютинацию эритроцитов (РПГА), может привести к получению результатов, не подлежащих трактовке.

Число ложноположительных и ложноотрицательных результатов меньше, чем при других серологических тестах. ЛПР при постановке РПГА бывают редко и возможны при трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта). Также, ложноположительные результаты регистрировались (в сумме менее 1 %) у наркоманов, у больных инфекционным мононуклеозом, боррелиозом, лепрой, при коллагенозах, циррозе печени, лимфосаркоме, а также у беременных.

Ложноотрицательные результаты реакции могут быть обусловлены конкуренцией между IgM- и IgG-антителами. Также ложноотрицательные результаты возможны у ВИЧ-инфицированных пациентов.

10. Модификации метода РПГА

Существует микро- и макромодификации постановки РПГА, чаще используется первая из-за экономичности, быстроты постановки и учета результатов.

Кроме того, разработан автоматический диагностический комплекс анализа изображений, что позволило производить количественную автоматическую оценку результатов и исключить субъективизм в интерпретации полученных данных. Аппаратно-программный комплекс распознает изображение, проводит обработку данных и выдает ответ в относительных единицах. 

Для автоматизации учета результатов РПГА также используются ридеры и автоматические анализаторы.

ТРРА (Treponema pallidum particle agglutination) - реакция агглютинации искусственных частиц для выявления антител к Treponema pallidum

Краткое описание теста TPPA

В настоящее время для диагностики сифилиса применяют также модификацию метода пассивной гемагглютинации - ТРРА (Treponema pallidum particle agglutination), в которой антиген бледных трепонем фиксирован на желатиновых частицах. Так как на искусственных полимерных частицах нет собственных антигенов, обусловливающих биологическую активность, то наборы для серодиагностики сифилиса на их основе имеют основания считаться более совершенными. Использование биологически инертных искусственных частиц сводит к минимуму неспецифическую агглютинацию, обычно наблюдаемую при использовании других носителей.

TPPA используется для серологической диагностики антител к различным видам и подвидам патогенных трепонем. Этот тест может использоваться для определения антител к возбудителям сифилиса, пинты, беджеля и фрамбезии.

Процедура исследования весьма проста и не требует специального оборудования - используются стандартные «U»-образные микропланшеты. В основе теста лежит агглютинация желатиновых частиц, сенсибилизированных антигенами T. pallidum, антителами, содержащимися в сыворотке крови пациента.

TPPA - это подтверждающий трепонемный тест, который удобно использовать как для исследования малого числа образцов, так и для массового скрининга. TPPA используется за рубежом в качестве подтверждающего теста и для замены микро-гемагглютинационного теста MHA-TP (microhemagglutination assay for antibodies to T. pallidum).

Чувствительность теста TPPA составляет от 85% до 100%, а специфичность - от 98% до 100%. Чувствительность TPPA для первичного сифилиса - 88%, для вторичного и позднего скрытого сифилиса 98%-100%.

Если TPPA используется для диагностики сифилиса, то антитела к другим видам трепонем (таким, как T. pallidum endemicum, pertenue, или carateum) могут вызвать ложноположительные результаты. Существует ряд методов, позволяющих удалить эти антитела из сывороточных образцов перед началом теста.

Принцип теста TPPA

TPPA - это метод пассивной агглютинации желатиновых частиц в сыворотке или плазме крови человека. Сыворотка, содержащая антитела к патогенной трепонеме, реагирует с желатиновыми частицами, сенсибилизированными антигеном бледных трепонем штамма Никольса, подвергнутых действию ультразвука. В результате реакции, в лунке планшета для микротитрования формируется гладкая пленка агглютинированных желатиновых частиц.

Если антитела отсутствуют, то частицы оседают на дно лунки планшета, формируя компактную «пуговку» из неагглютинированных частиц. Контрольные лунки с несенсибилизированными желатиновыми частицами должны также показать такую компактную «пуговку» для каждой сыворотки, то есть отсутствие агглютинации.

Применение теста TPPA

ТРРА - это тест универсального назначения, который может одинаково успешно применяться как при обязательном профилактическом обследовании групп населения на сифилис (скрининге), так и в специализированных дерматовенерологических учреждениях. Достоинством теста TPPA является его высокая чувствительность, не уступающая классическим тестам, которые до недавнего времени являлись «золотым стандартом» серодиагностики сифилиса. Среди других достоинств теста - высокая воспроизводимость, а также простота и скорость постановки реакции.

Тест TPPA применяется для подтверждения положительных результатов нетрепонемных скрининговых тестов на сифилис, таких, как тест VDRL, а также для обследования пациентов с отрицательными результатаи нетрепонемных тестов, но имеющих признаки или симптомы, указывающие на поздний сифилис. Не рекомендуется использование TPPA в качестве единственного скринингового теста на сифилис.

Кроме того, агглютинационный тест ТРРА может использоваться для исследования образцов спинномозговой жидкости при диагностике нейросифилиса. При этом, как и в отношении других серологических тестов, интерпретация результатов должна проводиться при обязательном сочетании с другими показателями и симптомами заболевания.

Результаты теста TPPA

Оценка результата происходит по системе «плюсов» - от (–) до (2+). Результаты теста видны невооруженным глазом и интерпретируются следующим образом:

Степень агглютинации	Показатель теста	Интерпретация
Агглютинированные частицы равномерно выстилают дно лунки планшета	2+	Положительный
Достоверное большое кольцо с неровными внешними полями и периферической агглютинацией	1+	Положительный
Частицы образуют компактное кольцо с просветом в центре и плавными гладкими внешними границами	±	Слабоположительный
Частицы формируют в центре лунки компактное кольцо с незначительным просветом в центре и ровной внешней границей	–	Отрицательный
Частицы формируют в центре лунки «пуговку» с ровной внешней границей	–	Отрицательный

Учет результатов производят, чтобы определить соответствие описанию выше. Образцы, показавшие неопределенный результат (±) необходимо исследовать повторно. В случае, если в нескольких тестах методом TPPA образец показывает неопределенный результат, рекомендуется провести исследование с помощью других методов.

Результаты анализа не следует рассматривать изолированно. Например, на ранней стадии инфекции число антител ещё слишком незначительно, вследствие чего TPPA и многим другим методам не хватает чувствительности. Поэтому, в случае подозрения на сифилис, даже если результаты тестов отрицательны, образцы необходимо исследовать ещё раз. Для постановки диагноза необходимо учитывать клинические симптомы, имеющиеся у пациента, клиническую историю и другие данные.

Так же, как и в реакции РПГА, для TPPA может наблюдаться феномен прозоны и ложноотрицательный результат в случае, если образец сыворотки содержит слишком высокий титр антител.

ИФА - Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА; The enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) является одним из многочисленных методов серологической диагностики инфекционных заболеваний. Иммуноферментный анализ (ИФА) в серодиагностике сифилиса - это тест на антитела классов M, G и A (IgM, IgG, IgA) против антигенов бледной трепонемы. Возможна постановка ИФА с ликвором.

Внедрение в практику иммуноферментного анализа (ИФА) вместо реакции Вассермана и других кардиолипиновых тестов значительно повысило качество лабораторной диагностики сифилиса. Существенным преимуществом данного метода является возможность автоматизации процесса исследования, что позволяет снизить влияние человеческого фактора.

1. История метода ИФА

Основные принципы иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя разработали E.Engvar и соавтор. (1971), B.Van Weeman и A.Schuurs (1971). Разработанный ими иммуноферментный анализ впервые был предложен для диагностики сифилиса в 1975 г. J. Veldkamp и A. Visser, которые оценили потенциал этого автоматизированного теста. ИФА начал повсеместно использоваться в диагностике сифилиса в 1980-е гг., когда были разработаны и сертифицированы диагностические тесты и стандартизированы методики тестирования. В СССР методику постановки ИФА для диагностики сифилиса разработали B.Н.Беднова, А.В.Бабий и А.В.Котровский (1982, 1983).

2. Принцип метода ИФА

Иммуноферментный анализ (ИФА) по механизму реакции близок к РИФ (выявляются те же антитела). Реакцию иммуноферментного исследования относят к иммунологическим реакциям, основанным на высокоспецифическом взаимодействии антигенов бледной трепонемы с антителами больного сифилисом.

В сифилидологической практике используется в основном непрямой вариант ИФА. Принцип наиболее часто используемого непрямого варианта реакции состоит в следующем. На поверхности лунок полистиролового планшета фиксируются иммунные комплексы, образующиеся при взаимодействии антител больного сифилисом с антигенами бледной трепонемы. После этого их выявляют их в цветной реакции с помощью специфических коньюгатов и соответствующих субстратно-хромогенных добавок.

Порядок выполнения теста следующий: на твердофазный носитель с присоединенным к нему антигеном помещается сыворотка больного. При наличии в ней антител, на поверхности носителя образуется комплекс антиген-антитело. Для «проявления» результатов реакции используются антивидовые антитела к Ig человека, конъюгированные с ферментными маркерами. В случае положительной реакции фермент, присоединившийся к комплексу антиген-антитело, разлагает добавленный в систему субстрат, в результате чего развивается цветное окрашивание разной интенсивности.

В реакции определения комплекса сорбированных на твердой фазе АГ и АТ проводят с помощью антиглобулиновых антител, меченных ферментом, по цветной реакции фермента с субстратом.

В реакции определение комплекса сорбированных на твердой фазе антигенов и антител проводят с помощью антиглобулиновых антител, меченных ферментом.

ИФА представляет возможность выявления сывороточных Ig разных классов. На рынке представлены системы, позволяющие определять раздельно IgM и IgG и суммарные антитела.

Специфические антигены, применяемые для ИФА, могут иметь различное происхождение:

ультраозвученные - их получают при результате разрушения бактериальной клетки T.pallidum ультразвуком или иным методом;

рекомбинантные - их получают генно-инженерными технологиями путем внедрения в геном бактериальной клетки (например, кишечной палочки E.Coli) гена, ответственного за синтез определенного антигена T.pallidum, с последующим наращиванием бактериальной массы продуцирующего микроорганизма, разрушением этих клеток, выделением и очисткой антигена;

пептидные - получают в результате последовательного химического синтеза антигенных эпитопов белков T.pallidum.

Организм способен образовать антитела почти к любой части молекулы антигена. При нормальном иммунном ответе этого обычно не происходит. Один или несколько иммуногенных пептидов, выделенных из белкового антигена обладают особой антигенностью, и большинство антител образуется именно к ним. На них развивается наиболее интенсивный иммунный ответ. Наибольшую информативность в ИФА показали иммунодоминантные участки белков бледной трепонемы с молекулярной массой 15 кД, 17кД и 47кД. В качестве антигена использовали детергентный экстракт, или соникат патогенных трепонем штамма Никольс.

3. Способ проведения исследований методом

Принцип метода заключается в выявлении сорбированного на твердой фазе (поверхность лунок пластикового планшета) специфического комплекса антиген-антитело антиглобулиновыми антителами, меченными ферментом (пероксидазой), с помощью цветной реакции с субстратом, учитываемой количественно спектрофотометрически.

Антигены, применяемые для сенсибилизации лунок полистиролового планшета могут быть:

лизатными - полученными в результате разрушения ультразвуком бледной трепонемы;
пептидными - полученными в результате химического синтеза фрагментов белков бледной трепонемы и имеющими антигенную реактивность, аналогичную исходным белкам возбудителя;
рекомбинантными - полученными с помощью методов генной инженерии, несущими антигенные детерминанты, идентичные бледной трепонеме.

В сифилидологической практике обычно используется непрямой вариант ИФА.

4. Учет результатов

При ИФА для визуализации реакции антиген-антитело используют реакцию фермента (щелочная фосфатаза или пероксидаза хрена) с субстратом, который при этом меняет свою окраску. Интенсивность окраски определяет позитивность реакции (от «–» до «++++»). Результаты ИФА могут оцениваться визуально по 4-бальной системе или инструментально в виде цифровых показателей оптической плотности, получаемых на специальных ридерах (типа Мультискан) при длине волны 492 нм. Т.к. оценка результатов проводится спектрофотометрически, это исключает субъективную интерпретацию.

5. При каких периодах заболевания лучше использовать

Сроки позитивации ИФА - с 4-ей недели от заражения. Результаты ИФА (как и РИФ) становятся положительными в первые дни первичного периода или в конце инкубации и остаются положительными во всех периодах. ИФА особенно ценен в ранней диагностике сифилиса – положительные результаты выявления антител могут быть получены уже в конце инкубационного периода заболевания (т. е. на 4–6-й неделе после инфицирования).

6. Чувствительность и специфичность

ИФА – высокочувствительный и специфичный тест, что является его преимуществом. ИФА по механизму реакции, чувствительности и специфичности близок к РИФ, т.к. в обеих реакциях принимают участие одни и те же антитела. Большинство исследователей отмечают высокую специфичность и чувствительность на всех стадиях болезни. Чувствительность различных вариантов ИФА, по данным Г. А. Дмитриева, достигает 98–100 %, а специфичность - 96–100 %. По данным ЦНИКВИ, чувствительность ИФА при сифилисе составляет 99,1% (Приказ № 87 М3 РФ).

Вариант твердофазного ИФА (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) относится к самым чувствительным серологическим реакциям, позволяя выявлять 0,0005 мкг/мл антител и 0,000005 мкг/мл антигенов.

7. Область применения метода

Метод рекомендуется использовать при обследовании беременных, контактных лиц, доноров и представителей групп риска. ИФА может применяться как в качестве скринингового, так и подтверждающего теста. За относительно короткое время своей истории, ИФА превратился из ориентировочного теста в подтверждающий. В диагностике сифилиса тест используется также как подтверждающий для образцов, демонстрирующих положительные результаты при использовании различных нетрепонемных тестов и РПГА.

Метод ИФА может быть использован в количественном варианте с расчетом индекса позитивности, или реактивности, который позволяет оценивать уровень антител в образце.

В настоящее время в России применение иммуноферментного анализа для диагностики сифилиса регламентировано Приказом Минздрава РФ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» (приложение №1 «Постановка отборочных и диагностических тестов на сифилис»). В приказе планируется замена РСК в комплексе серореакций (КСР) на ИФА и РПГА.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Иммуноферментный анализ является сложным многоступенчатым исследованием, при котором необходимо строго соблюдать все рекомендации производителей диагностических наборов, правила регулировки и настройки применяемой в исследовании аппаратуры.

Источником ошибок при постановке ИФА могут являться следующие моменты:

Исследование в реакции гиперлипидемичной, гемолизированной сыворотки крови или образцов с признаками бактериального пророста;

Не практиковать двух- и более кратного замораживания образца биологического матери¬ала, при необходимости повторного исследования использовать сыворотку из пробирки-дубликата;

Нарушение сроков и условий хранения иммуносорбента и отмывающего раствора; использование тест-наборов с истекшим сроком годности;

Применение компонентов реакции из других диагностических наборов;

Нарушение времени проведения этапов реакции;

Высыхание лунок иммунологического планшета на этапах реакции;

Повторное использование пластиковой посуды (пластиковых лоточков) для приготовления смеси хромогена и субстрата;

Несоблюдение периодичности метрологического контроля параметров работы применяемых аппаратов (вошера и спектрофотометра);

Использование при постановке реакций загрязненной лабораторной посуды: колб, мерных цилиндров, пробирок, пипеток, наконечников пипеточных дозаторов;

Недостаточная тщательность выполнения разведений образцов биологического материала;

Ошибки при внесении образца биологического материала в соответствующую лунку планшета;

Ошибки при перенесении результатов исследования в журнал регистрации, протокол исследования или бланк ответа.

Тщательное выполнение рекомендаций инструкций по применению диагностических тест-наборов, регулярная поверка точности пипеточных дозаторов и автоматических приборов, применение внутреннего положительного и отрицательного контролей позволяют получать результаты ИФА-исследования с высокой воспроизводимостью.

9. Особенности, преимущества и недостатки

ИФА относится к современным, перспективным методам серодиагностики сифилиса ввиду его простоты, воспроизводимости, доступности. Определение антител методом ИФА является идеальным способом диагностики, подходящим для одновременного исследования большого числа образцов. Благодаря своим преимуществам, он завоевал популярность во всех странах.

Технология ИФА-исследования предусматривает соблюдение всех рекомендаций производителей коммерческих диагностических тест-наборов и тщательности выполнения процедуры исследования. Для проведения исследований в ИФА необходимо приобретение дополнительного специального оборудования. Методика постановки занимает более длительное время по сравнению с РМП, RPR и РПГА.

Наличие автоматизации ряда этапов или всего процесса в целом позволяет одновременно исследовать большое количество образцов биологического материала при высокой степени стандартизации исследования, минимизации субъективного элемента в оценке результатов, возможности хранения фиксированных протоколов исследования, что позволяет архивировать данные исследования и обращаться к ним повторно для ретроспективного анализа.

Достоинства:

Дает возможность дифференцированного и суммарного определения IgM и IgG антител к возбудителю сифилиса.
высокая чувствительность и специфичность, приближающиеся к 100%,
воспроизводимость
возможности автоматизации

К преимуществам ИФА относят высокую специфичность (96-100%) и чувствительность (98-100%), отмечаемые большинством исследователей.

Наличие автоматизации ряда этапов или всего процесса в целом позволяет одновременно исследовать поток с большим количеством образцов биологического материала при высокой степени стандартизации исследования, минимизации субъективного элемента в оценке результатов, возможности хранения фиксированных протоколов исследования, позволяющих архивировать данные исследования и обращаться к ним повторно для ретроспективного анализа.

Существенными недостатками методик, выполняемых вручную, в т. ч. определения антител к антигенам T. pallidum методом ИФА, являются:

~ возможные ошибки персонала при проведении исследования (оплошность, небрежность, нарушение технологии);

~ невозможность полной стандартизации процесса исследования при ручном варианте постановки ИФА;

~ повышенный риск заражения персонала.

10. Модификации метода

Наряду с классическим непрямым ИФА известен и метод ловушечного ИФА . Он был предложен в 1989 г. O. E. Ijsselmudien и соавт. для выявления антител класса IgM к антигенам Tr. pallidum. Метод обладает высокой специфичностью и чувствительностью.

На поверхности лунок планшета сорбированы очищенные антитела к иммуноглобулинам человека класса M, и после инкубации исследуемой сыворотки все IgM связываются с носителем. Наличие же среди связанных IgM специфичных для антигенов Tr. pallidum выявляется с помощью антигенов Tr. pallidum, конъюгированных с ферментом.

Этот метод позволяет выявлять антитела не только класса IgM, но и классов IgG, IgA. Для этого лунки планшетов сенсибилизируются аффинно очищенными антителами определенного класса против иммуноглобулинов человека. При этом из сыворотки вылавливаются антитела этого класса, а выявление трепонемоспецифических антител осуществляется путем их соединения с конъюгатом, представляющих соединение трепонемного антигена с ферментом.

Использование ловушечного варианта иммуноферментного анализа снижает риск ложноположительных реакций, опосредованных ревматоидным фактором крови, перекрестными реакциями между иммуноглобулинами классов М и G. При обследовании новорожденных в этом случае также исключаются ложноположительные результаты анализа, связанные с выявлением IgM, направленных против материнских антитрепонемных IgG.

В качестве вариантов ИФА за рубежом нашли широкое применение enzyme immune assay (EIA) и система ICE Syphilis . В последней в ячейках планшета сорбирована смесь антител к IgM и IgG, а также трех рекомбинантных белков T. pallidum. Положительные результаты тестируются в этой же тест-системе в двух повторах для выдачи окончательного результата.

В России был разработан ряд тест-систем для серодиагностики сифилиса методом ИФА с отечественными реагентами. Эти системы обладают высокой специфичностью и чувствительностью.

Помимо вышеперечисленных, существуют также другие варианты ИФА, в том числе допускающие прямое выявление возбудителя в крови (прямой ИФА), дот-ИФА с постановкой реакции на полосках нитроцеллюлозы, ИФА с капиллярной кровью, а также иммуноблоттинг, или Western Blot, с одновременным выявлением АТ к различным компонентам возбудителя.

Современной улучшенной модификацией ИФА является иммуноблоттинг.

ИХА (иммунохемилюминесцентный анализ), ИХЛ (иммунохемилюминесценция)

С развитием лабораторной диагностики в условиях модернизации здравоохранения РФ в практику лабораторий вошла автоматизация лабораторных исследований, которая позволяет стандартизовать аналитические этапы исследований. Это способствует повышению качества диагностики. С внедрением автоматизации стали применяться новые высокотехнологичные методы, обладающие высокой чувствительностью и специфичностью, такие как иммунохемилюминесцентный анализ (ИХА) (chemiluminescence immunoassay - CLIA)

Хемилюминесценция - процесс излучения фотонов при переходе электронно-возбужденных продуктов окислительных химических реакций в исходное энергетическое состояние. В ходе реакции хемилюминесценции выделяется значительное количество энергии, и квантовый выход излучаемого света достаточно высок. Из всех неизотопных методов хемилюминесценция обеспечивает наиболее высокую чувствительность. Для иммунометрических методов чувствительность хемилюминесценции на порядки превосходит чувствительность радиоиммуноанализа.

Метод иммунохемилюминесценции (ИХЛ) в настоящее время нашел свое применение при диагностике маркеров опухолей, аутоиммунных заболеваний, диабета, кардиомаркеров, гормонов (щитовидной железы, надпочечников, женских и мужских половых гормонов), torch-инфекций, вирусных гепатитов, вирусов группы герпеса.

На основе метода иммунохемилюминесценции разработан ряд высокочувствительных и специфичных (98-100%) тест-систем для диагностики сифилиса, применяемых в основном за рубежом.

В методе в качестве антигенов используются полученные генно-инженерными методами рекомбинантные липопротеины, которые являются полными аналогами антигенов T.pallidum.

Метод ИХА по результатам клинического исследования получил признание и рекомендован к применению в лабораторной диагностике сифилиса в Российской Федерации в качестве скринингового и подтверждающего теста при наличии в лабораториях соответствующего оборудования. В 2012 г. ИХА был включен в качестве скринингового и подтверждающего теста для диагностики сифилиса в Клинические рекомендации по ведению больных с инфекциями, передаваемыми половым путем, и урогенитальными инфекциями

Таким образом, использование высокотехнологичного ИХА, вошедшего в практику как мировой, так и отечественной лабораторной диагностики с внедрением автоматизации, обеспечивает следующие преимущества:

исключение влияния субъективных факторов на аналитическом этапе исследования
безопасность персонала при выполнении исследований потенциально инфицированного биологического материала
повышение скорости получения результатов пациентом
стандартизацию исследований и контроль качества исследования
выдачу надежных достоверных результатов пациентам
высокое качество клинических лабораторных исследований.

По чувствительности метод ИХА сопоставим с методом радиоиммунного анализа, а по простоте исполнения, безопасности для персонала и многим другим параметрам – превосходит его.

Метод ИХА, обладающий высокой чувствительностью и специфичностью (98–100%), дает возможность количественного определения уровня антител к возбудителю сифилиса, может быть использован для подтверждения сифилитической инфекции и скрининга. Ограничения применения: не может быть использован для контроля эффективности терапии, может давать ложноположительный результат.

Иммунохроматография (ИХГ).

Относительно новыми для использования в Российской Федерации являются методы выявления трепонемоспецифических антител, основанные на методах иммунохроматографии (ИХГ). Как и в методе ИХА, в качестве антигенов используются рекомбинантные липопротеины, полученные генно-инженерными методами (например: антигены Tp15, Tp17, Tp47) и биосинтетический пептид TmрА. Перечисленные антигены также используются в разных сочетаниях в составе иммуносорбентов в ИФА и иммуноблоттинге.

Метод ИХГ позволяет быстро определять содержание трепонемоспецифических антител к возбудителю сифилиса в образцах сыворотки и цельной крови без использования специального лабораторного оборудования и применяется при оказании первичной медико-санитарной помощи, в том числе по эпидемиологическим показаниям.

Ограничения применения: не может быть использован для контроля эффективности терапии,может давать ложноположительный результат.

ПБТ (простые быстрые тесты у постели больного)

Относительно недавно в серодиагностике сифилиса начало развиваться направление по разработке так называемых простых быстрых тестов (ПБТ), или тестов у постели больного (Point-of-care - РОС). Простые быстрые тесты у постели больного, или иммунохроматографические тесты позволяют проводить быстрое определение содержания трепонемоспецифических антител к возбудителю сифилиса в образцах сыворотки и цельной крови без использования специального лабораторного оборудования и применяться при оказании первичной медико-санитарной помощи, в том числе по эпидемиологическим показаниям. Ограничения применения: не могут быть использованы для контроля эффективности терапии, могут давать ложноположительный результат.

Эти тесты основаны на иммунохроматографическом определении антител к трепонемным антигенам бледной трепонемы я выполняются на стрипах; при этом можно использовать как цельную кровь, так и сыворотку (Herring A., Ballard R. et al, 2006). Формат тестов позволяет проводить исследования при отсутствии специального оборудования и без использования электричества. Однако ввиду относительно невысокой чувствительности и специфичности эти тесты пока не находят своего широкого применения в практике.

Иммуноблотинг (Western Blot)

В последние годы появились методы исследования, направленные на обнаружение и анализ содержания антител к каждому антигену бледной трепонемы раздельно. Один из таких методов - это метод иммунного блота (или блоттинга, имммуноблотинга, Western blot), который применяют для определения IgG- либо IgM-антител к бледной трепонеме. Метод иммуноблоттинга является модификацией иммуноферментного анализа - вариантом ИФА.

Имммуноблотинг является одним из самых современных методов серодиагностики сифилиса и активно используется за рубежом. Свое название ("западный блоттинг") он получил в качестве юмористического ответа на названия техник определения ДНК ("южный блоттинг") и РНК ("северный блоттинг").

1. История метода

Иммуноблоттинг (Western blot) используют для определения IgG- либо IgM-антител к антигенам бледной трепонемы (Herremans М. et al., 2007).

2. Классический иммуноблот

Классический иммуноблот (Western Blot Analysis) сочетает в себе иммуноферментный анализ и применение электрофоретического метода. Белки-антигены возбудителя сифилиса предварительно разделяют методом электрофореза и переносят на носитель - нитроцеллюлозную мембрану (стрип). Этот перенос и называется блоттингом. Затем этот носитель с разделенными точками (blots), обрабатывают исследуемой сывороткой и антителами к IgG или IgM, меченными ферментами либо радиоактивными веществами. Метод предполагает использование природных или рекомбинантных белков трепонемы.

Электрофорез - это разделение заряженных соединений на основе их подвижности в электрофоретическом поле. При наложении разности потенциалов в какой-то среде положительно заряженные молекулы движутся к отрицательно заряженному электроду, а отрицательно заряженные - к положительному электроду.

Большинство глобулярных белков собраны таким образом, что большая часть заряженных групп, а именно гидрофильных, расположена на поверхности белка, тогда как незаряженные, гидрофобные остатки погружены во внутрь глобулы. В электрическом поле в соответствии со своим зарядом белки мигрируют по направлению к противоположно заряженному электроду.

Электрофоретическое разделение белков производят в синтетический гелевой среде на основе полиакриламида. Для разделения белков в соответствии с их молекулярной массой перед началом электрофореза белковую смесь преинкубируют в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН).

Детальные исследования зарубежных ученых Weber и Osborn (1969) показали, что после такой обработки единственным фактором, который может повлиять на подвижность белков в полиакриламидном геле (ПААГ) является размер белка, а точнее его молекулярная масса. Это позволило применить метод электрофореза в ПААГ в присутствии ДСН для достаточно точного определения молекулярной массы белков и пептидов. В зарубежной литературе этот метод был назван SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis).

Профиль реактивности в классическом WB-тесте с природными антигенами (метод электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия). (1) - контрольный положительный результат, (2) - контрольный отрицательный результат, (3-6) - клинические образцы.

В тестах на сифилис с помощью данного метода, предварительно очищенная и разрушенная до составных компонентов бледная трепонема подвергается электрофорезу в полиакриламидном или агарозном геле. При этом входящие в ее состав антигены разделяются по молекулярной массе.

Затем методом вертикального электрофореза антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый глазом спектр антигенных полос, характерный для бледной трепонемы.

При проведении анализа на нитроцеллюлозную полоску (стрип) наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и др.). Если в пробе есть специфические антитела, то в процессе инкубации они прочно связываются со строго соответствующими (комплементарными) им антигенными полосами и образуют комплекс “антиген – антитело”.

После удаления несвязавшихся иммуноглобулинов во время отмывания стрипа следует инкубация с конъюгатом – меченными ферментом антителами к иммуноглобулинам человека (антитела к IgG или IgM человека), в ходе которой на поверхности мембраны происходит присоединение к имеющимся комплексам “антиген – антитело” антител, меченных ферментом.

После удаления несвязавшегося конъюгата в ходе инкубации с раствором субстрата происходит взаимодействие фермента с субстратом, в результате чего развивается цветная реакция – окрашивание участков мембраны (в виде полос), где располагаются отдельные антигены бледной трепонемы, антитела к которым находились в исследуемой сыворотке. Интенсивность окрашивания зависит от количества связавшихся антител из сыворотки. Результат реакции оценивается визуально.

Наличие полос на определенных участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определенным антигенам бледной трепонемы.

Определяемые с помощью этого метода иммунодетерминанты 15, 5, 17, 44,5, 47 кД обладают диагностической значимостью при сифилисе. Ig G-иммуноблоттинг по чувствительности и специфичности подобен РИФ с абсорбцией (РИФ abs). Ig М-иммуноблоттинг может служить диагностическим тестом для врожденного сифилиса.

3. Иммуноблот в формате линейного иммунного анализа

Линейный иммунологический анализ (line immunoassay, LIA) позволяет одновременно определять антитела к антигенам бледной трепонемы в сыворотке или плазме крови человека. Антигены заранее нанесены на тест-полоски (стрипы), которые поставляются в составе коммерческих диагностических наборов.

Стрипы изготавливаются из нитроцеллюлозной мембраны, полиамидной с пластиковой подложкой или нейлоновой мембраны с пластиковой основой. При изготовлении, на тест-полоску помещают несколько дискретных антигенов в виде отдельных антигенных линий. Помимо этих антигенов сифилиса, на каждую полосу наносятся еще четыре контрольных линии: стрептавидин и контрольные пробы (3 + , 1 + и ± линия среза).

Для полосок используются искусственные антигены, полученные генно-инженерными способами - рекомбинантные белки или синтетические полипептидные конструкции. Это аналоги поверхностных антигенов бледной трепонемы - TpN15, TpN17, TpN47 и TmpA с молекулярной массой 15, 17, 47 kDа и 44,5 (ТmpА), где kDа=kiloDaltons. С их помощью определяют сывороточные антитела к различным иммунодоминантным компонентам возбудителя.

Инкубация испытательного образца проходит в кювете, куда также помещается индикаторная полоса. Антитела к T. рallidum определяются по связыванию с антигенами, нанесенными на тест-полоски. Если в образце имеются специфичные для T. pallidum антитела, они образуют связи с отдельными линиями антигенов. При взаимодействии антител, содержащихся в испытуемой сыворотке, с дискретными антигенами Т. pallidum, помещенными тест-полоску, образуется комплекс антиген-антитело в виде визуально определяемых цветных полос.

При учете результатов иммуноблотинга оценивают реактивность сыворотки к каждому из антигенов в отдельности. Суммарный положительный ответ выдается при получении результата одновременно с двумя или тремя из представленных антигенов.

Исследовательские процедуры проводятся вручную или на специальном анализаторе, с интерпретацией результатов с помощью специализированной компьютерной программы для инфекционных заболеваний.

За счет высокой степени очистки рекомбинантных антигенов и одновременного выявления антител к наиболее иммуногенным детерминантам возбудителя сифилиса, метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

4. Учет результатов

Для считывания интенсивности окрашивания антигенных полос на стрипах разработаны фотометры, работа которых основана на отражении сигнала, что исключает субъективную оценку и дает потенциальную возможность автоматизации.

5. При каких периодах заболевания лучше использовать

Тесты, использующие метод иммуноблоттинга, могут определять специфические антитела к антигенам бледной трепонемы на очень ранней стадии заболевания. Наиболее значимыми в диагностике сифилиса являются антитела к антигенам бледной трепонемы TpN15, TpN17, TmpA и TpN47. Эти антигены - мембранные белки, имеющие молекулярную массу 15, 17, 44,5 и 47 кДа соответственно.

При внедрении в организм человека бледной трепонемы, противосифилитические антитела появляются в таком порядке: сначала развивается иммунный ответ к антигенам TpN17, затем к TpN47, после TpN15 и позже всех TmpA. При учете результатов теста оценивают реактивность сыворотки к каждому из них в отдельности. Например, когда в линейном блоте имеется реактивность только к антигенной линии TpN17 и TpN47, это означает, что болезнь в начальной стадии. Чем больше антигенных линий становятся реактивными, тем дальше развивается инфекция. При лечении сифилиса картина реактивности в этом тесте меняется.

Определение IgM к протеинам с молекулярной массой 15,17, 41, 47 кДа позволяют выявить 29,2% больных при вторичном сифилисе, 12,5% – при раннем скрытом сифилисе и 8,0% – при серорезистентности. Поиск IgG к тем же молекулам характеризуется чувствительностью 61,6% при серорезистентности и 100% при вторичном и раннем скрытом сифилисе.

6. Чувствительность и специфичность

Согласно данным литературы, чувствительность и специфичность теста очень высокие - 99,6-100 и 99,3-99,5 % соответственно. В классическом методе это достигается за счет электрофоретического разделения белков, глико- и липопротеинов и максимальной специфичности детектирующих иммунных сывороток или моноклональных антител. В оптимально отработанных условиях с помощью иммуноблоттинга можно обнаруживать антиген в количествах менее 1 нг в испытуемом объеме.

Чувствительность линейного блота также составляет 99.6%, а специфичность находится в диапазоне между 99.3% и 99.5%.

По оценке специалистов иммуноблоттинг с рекомбинантными высокоспецифичными антигенами по чувствительности и специфичности аналогичен РИФ-абс.

Согласно данным зарубежной литературы и результатам изучения в ЦНИКВИ, метод иммуноблоттинга обладает при диагностике сифилиса высокой чувствительностью (98,8-100%) и специфичностью (97,1-100%).

7. Область применения метода

Иммуноблотинг (иммуноблот) является высокоспецифичным и высокочувствительным референтным методом. Высокие чувствительность и специфичность позволяют рассматривать этот метод как подтверждающий тест на сифилис. Метод может применяться для подтверждения диагноза, а также в случае, если другие трепонемные тесты дают сомнительные и противоречивые результаты. С помощью иммуноблоттинга можно подтвердить диагноз у пациентов с положительными или неопределенными результатами анализов, полученных в том числе и при помощи РПГА или ИФА.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Ложноположительные результаты очень редки. Ложноотрицательные результаты бывают также достаточно редко и наблюдаются у больных с иммунодефицитами – чаще у ВИЧ- инфицированных и при эффекте диагностического «окна» из-за задержки синтеза антител, а также при ошибках на этапе постановки.

Использование современных тест-систем диктует точное соблюдение всех требований, предъявляемых как к материалу, так и к выполнению постановки реакции. В основном, источник ошибок - нарушение порядка и технологии проведения исследования (особенно для классического вестерн-блота), несоблюдение рекомендаций производителей тест-наборов. . Ошибки могут быть также допущены при сборе, доставке, хранении проб сыворотки крови, а также при выполнении тестов. Помимо испорченных образцов, среди других возможных причин - использование тест-наборов с истекшим сроком годности, а также ошибки при анализе результатов исследования.

9. Особенности, преимущества и недостатки

Уникальность иммуноблота заключается в его высокой информативности и достоверности результатов.

Тест не требует высокоочищенных антигенов, референтных и контрольных сывороток. Идентификация мишени антител основана на молекулярном весе белка, с которым реагируют антитела из сыворотки пациента. В одной реакции может быть обнаружено связывание антител с несколькими антигенами, каждый из которых может быть точно охарактеризован. За счет этого иммуноблоттинг обладает рядом преимуществ перед другими методами выявления антител, результаты которых зависят от стандартизации, чувствительности, качества субстрата, нестабильности или нерастворимости определенных антигенов

Метод легко воспроизводим, относительно прост в исполнении и интерпретации результатов, дает возможность определять спектр антител сразу к нескольким антигенам Т. pallidum и оценивать вклад в общую реакцию антител различной специфичности.

Применение высокоочищенных рекомбинантных и пептидных антигенов снижает до минимума неспецифическую реактивность сывороток. Использование метода дает возможность отказа от трудоемких и субъективных методов, представляющих опасность для исследователя (перевивка штаммов Г. pallidum, работа с патогенной Т. pallidum при постановке реакции). Это определяет предпочтение метода иммуноблоттинга перед другими трепонемными тестами (РИФ и в особенности РИБТ) для диагностики сифилиса.

10. Модификации метода

Существует несколько коммерческих тест-систем на основе данного метода. Одни из них выполнены в формате вестерн-блота , состоят из стрипов, на которые перенесены белковые компоненты T. pallidum, предварительно разделенные электрофорезом в полиакриламидном геле.

Другие выполнены в формате линейного блота , состоят из стрипов, на которых в виде дискретных линий сорбированы рекомбинантные и синтетические полипептиды - аналоги поверхностных антигенов T. pallidum, TpN15, TpN17, TpN47 и TmpA.

Результаты вестерн-блота труднее интерпретировать, так как на стрипах выявляется большое разнообразие антител, многие из которых являются группоспецифическими. Напротив, интерпретация результатов линейного блота не вызывает затруднений; кроме того, дополнительные контрольные линии, нанесенные на стрип, позволяют проводить полуколичественную оценку уровня антител к четырем антигенам T. pallidum.

xMAP-технология

хМАР - современная технология, позволяющая проводить многопараметрические исследования путем одновременной детекции множества аналитов в одном биологическом образце. В качестве твердой фазы используются окрашенные микросферы, покрытые захватывающими реагентами (олигонуклеотидами, антителами, антигенами).

Исследуемый образец добавляется к раствору, в котором содержатся микросферы. Выявляемые в образце аналиты связываются с соответствующей микросферой, после чего в раствор вносится детектирующий агент (детектирующие антитела, флюоресцентная метка). Для детекции определяемого аналита используется система двух лазеров, позволяющих проводить как качественную оценку наличия аналита в пробе (для этого используется красный лазер, классифицирующий микросферы по цвету), так и количественную оценку содержания аналита в пробе (для этого используется зеленый лазер).

Исследование осуществляется в автоматическом режиме на анализаторах типа Bio-Plex 200 (bio-rad), Bio-Plex2200 (bio-rad), Luminex100 (luminex), Luminex200 (luminex) снабженных программным обеспечением.

Ппроизводительность xMAP-технологии значительно превышает показатели классического твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) при существенно меньшем объеме биоматериала.

хМАР-технология, обладающая высокой аналитической чувствительностью, в настоящее время используется для решения широкого круга клинических задач. С ее помощью в одном образце биологического материала осуществляется одновременная детекция известных онкомаркеров, кардиомаркеров, маркеров острой фазы и сахарного диабета, широкого спектра цитокинов, хемокинов, факторов роста. Одномоментное выявление множества аналитов в одном биологическом образце позволяет существенно сократить время обследования пациента. К настоящему времени разработан ряд тест-систем для выявления антител к возбудителям ИППП, в частности сифилитической инфекции, методом хМАР.

МЕДИЦИНСКИЙ ЦЕНТР "На Самотечной"

Прием по предварительной записи! Суббота, воскресенье.