Решающее значение в постановке диагноза ВИЧ-инфекции играет лабораторная диагностика, которая заключается в обнаружении АТ к ВИЧ в крови методом ИФА с последующим подтверждением положительных результатов методом ИБ. Такой метод диагностики ВИЧ-инфекции позволяет выявлять ВИЧ-инфицированных лиц с эффективностью 99%.
Показания к применению различных лабораторных исследований и особенности интерпретации результатов
В настоящее время для скринингового этапа диагностики ВИЧ-инфекции используются наборы реагентов третьего и четвертого поколений, основанные на методе ИФА. Отличительной особенностью тестов четвертого поколения является возможность одновременного выявления АГ (p24) и суммарных АТ, в то время как тесты третьего поколения позволяют определять только АТ. По возможности, предпочтение должно отдаваться тестам четвертого поколения, ввиду их более высокой диагностической чувствительности и возможности выявления инфекции у лиц в период серологического окна.
Отрицательный результат при выявлении АТ к ВИЧ методом ИФА не всегда свидетельствует об отсутствии заражения. Серьезную проблему представляют те случаи, когда тест проведен в период серологического окна, т.е. в первые недели после заражения, когда еще не выработались в достаточном количестве АТ к ВИЧ. У отдельных лиц период серологического окна может затянуться на несколько месяцев, поэтому при наличии данных, свидетельствующих о контакте с инфицированными ВИЧ, обычно проводят повторные исследования через 2–3 месяца. Ложноотрицательные результаты выявления АТ к ВИЧ при использовании ИФА могут быть получены в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса образования АТ.
Положительный результат выявления АТ методом ИФА указывает на вероятность заражения ВИЧ-инфекцией, но иногда этот результат может быть ложноположительным, например, при наличии у человека опухолей, аллергических заболеваний, во время беременности, при аутоиммунных заболеваниях, существенных изменениях показателей биохимического исследования крови, ряде хронических заболеваний. В таких случаях требуются дополнительные исследования в экспертной лаборатории.
В случае получения положительного результата выявления АТ к ВИЧ методом ИФА требуется его подтверждение. На первом этапе подтверждения анализ повторяют в той же тест-системе в двух лунках - это позволяет исключить технические ошибки. Если результат подтвердился, определение АТ методом ИФА в сыворотке пациента повторяют, используя два референтных набора реагентов. Если хотя бы в одном из таких исследований получен положительный результат, предпринимают третью стадию подтверждения: исследование методом ИБ, который позволяет выявить АТ к отдельным белкам-антигенам ВИЧ.
Результаты, полученные методом ИБ, интерпретируются как положительные, сомнительные и отрицательные. Отрицательными (негативными) считают результаты, если в исследуемой сыворотке не обнаружены АТ ни к одному из АГ ВИЧ или имеется слабая реакция с белком р17. Наиболее веским основанием для положительной реакции является обнаружение АТ к белкам оболочки ВИЧ (гликопротеидам gp41, gp120, gp160). Результат считается положительным в случае обнаружения АТ к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. При наличии реакции только с одним из белков оболочки, в сочетании с реакцией с другими белками или без нее, результат считается сомнительным, в этом случае рекомендуется провести исследования для обнаружения АГ р24 или ДНК/РНК ВИЧ. Если выявлен АГ р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование с использованием ИБ проводится через 2 недели после получения первого неопределенного результата и в дальнейшем через каждые 2 недели до получения положительного результата в подтверждающем тесте. Если через 6 месяцев после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный.
Нередко по прошествии 1–3–6 месяцев с момента получения сомнительного результата в сыворотке крови появляются одно за другим АТ ко всем АГ ВИЧ. В этом случае сомнительный результат – свидетельство начальной стадии ВИЧ-инфекции. В ряде случаев сомнительные результаты ИБ наблюдаются у неинфицированных лиц, в организме которых есть АТ, схожие с истинными АТ к ВИЧ.
Одним из косвенных признаков ВИЧ-инфекции является избирательное уменьшение CD4+ Т-клеток хелперов в связи с тем, что ВИЧ обладает тропностью к клеточному рецептору CD4. Однако эти изменения могут отсутствовать на определенных стадиях ВИЧ-инфекции, иметь индивидуальные колебания у разных пациентов, а также встречаться при других заболеваниях. Так, у взрослых пациентов, находящихся в латентной стадии заболевания, количество CD4+ лимфоцитов обычно превышает 0,5 . 109/л, что соответствует значениям у здоровых людей.
Скрининг – выявление частоты нераспознанной заболеваемости с помощью быстродействующих тестов. В массовой практике тестирования и скрининга чаще всего используют методы иммуноферментного анализа, которые могут давать как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Эти тесты были разработаны с целью исследования донорской крови и поэтому имеют высокую чувствительность, что даже вероятная ошибка при их исследовании дает положительный результат. В этом случае кровь обязательно подлежит уничтожению, а самому донору проводится контрольное тестирование. Ложноотрицательные результаты зависят от того, что инкубационный период для ВИЧ – инфекции составляет 1-3 месяца. В течение этого периода человек является вирусоносителем, чего тест на антитела к ВИЧ не выявляет.
Возможность пройти тест на наличие антител к ВИЧ должна предоставляться каждому. Тестирование может быть добровольным и обязательным. При добровольном анонимном тестировании пациент регистрируется под номером, при этом в документ не заносятся ни адрес, ни фамилия пациента. При конфиденциальном тестировании сведения о личности пациента отражаются в его медицинских документах.Тестирование на ВИЧ должно сопровождаться консультированием пациента как до, так и после проведения тестирования. Адекватное информирование пациента становится лучшей психотерапией.Пациенты окончательно информируются о результатах тестирования только после подтверждения положительных результатов тестирования. Это делается для того, чтобы избежать трагических случаев, подобных тому, произошел в Риге в 1998 г.: супруги, узнав о положительных результатах тестирования у одного из них, покончили жизнь самоубийством; посмертные исследования факта заражения ВИЧ не обнаружились. Проблема обязательного тестирования и скрининга на ВИЧ вызывает бурные споры. В США с 1985 г. Введено обязательное тестирование в армии. В некоторых штатах проверка на СПИД обязательна перед вступлением в брак, а с 1997 г. К обязательной проверке на ВИЧ всех новорожденных приступили в штате Нью-Йорк.
Многие зарубежные специалисты считают, что практика обязательного тестирования на ВИ не только нарушает права человека, но также оказывается малоэффективной как заслон на пути распространения эпидемии, а поэтому её исполнение должно быть ограничено.
В нашей стране обязательная регистрация заболеваний СПИДом была введена в 1985 г., с момента выявления первого случая заболевания. В 1987 г. По инициативе врачей-эпидемиологов по Всесоюзному радио было сообщение об открытии в Москве кабинета анонимного обследования на СПИД. Через несколько дней этот кабинет заработал, принимая до тысячи человек в месяц. В итоге с 1987 по 1992 гг. было проведено свыше 85 млн. тестов на ВИЧ.
В России стране широко применяется «метод эпидрасследования». Эпидрасследование – это выявление источника заражения в каждом случае инфекции, по возможности, восстановление всей «цепочки» передачи инфекции и одновременно предпринимаемые меры по профилактике распространения инфекции. В принятом в 1995 г. Федеральном законе «О предупреждении распространения в РФ заболевания, вызываемого вирусом иммунодефицита человека» требование обязательного тестирования на СПИД «партнеров» было отменено. Отменено также и обязательное профилактическое наблюдение ВИЧ – инфицированных в учреждениях здравоохранения. Согласно закону, обязательному тестированию на СПИД подлежат только доноры крови, биологических жидкостей, органов и тканей, а также представители отдельных профессий.
Диагностика ВИЧ-инфекции на ранних порах просто необходима. От этого зависит сложность терапии и развитие патологических осложнений. На сегодняшний день существует множество инновационных методов исследования для выявления столь страшного диагноза. Именно об этом и пойдет речь дальше.
Какие существуют методы диагностики ВИЧ-инфекции?
На самом деле существует много методик диагностирования ВИЧ. В среднем они разделены на подгруппы – лабораторное исследование, дифференциальное обследование и аппаратное. Кроме того, нужно учитывать этапы проведения диагностических мероприятий. Обо всем этом и других аспектах подробнее поговорим дальше.Лабораторная диагностика
Для рассматриваемого метода диагностики необходима высокоспециализированная лаборатория. В таких условиях можно выявить следующие показания:- Определяются антитела, антигены возбудителей и иммунные комплексы.
- При обнаружении вируса, его культивируют и выявляют геномный материал и ферменты.
- Оценивается функциональность иммунитета.
- Осуществляется эпинадзор и мониторинг превалентности вируса иммунодефицита человека.
- Изучается динамика распространения, и определяется популяция.
- Можно определить степень безопасности трансплантации и гемотрансфузии.
Дифференциальная диагностика
Дифференцируется заболевание по разным причинам:- При первых симптомах инфицирования ВИЧ, находящегося в фазе обострения, особенно если существует мононуклеозоподобный синдром. Диагностика отталкивается от таких патологий, как мононуклеоз инфекционного характера, сифилис, краснуха, аденовирус, лейкоз в острой форме, иерсиниоз, гиперкератоз.
- Если ВИЧ переходит в стадию генерализованной лимфаденопатии персистирующего характера, тогда дифференцируются болезни, при которых лимфатические узлы увеличиваются. Например, лимфолейкоз, сифилис, токсоплазмоз, лимфогранулематоз. В этой фазе у больного симптоматика становится более выраженной.
- Если обнаруживаются вторичные патологии, дифференцируется иммунодефицит, возникший на фоне приема некоторых групп препаратов – лучевая терапия, применение глюкокортикостероидных средств и цитостатических препаратов. Значительно снижается иммунитет и при таких заболеваниях, как миелома, лимфоидная лейкемия, онкологические новообразования и прочее.
- Если ВИЧ локализуется в ротовой полости, тогда дифференцируются болезни слизистой оболочки рта.
Экспресс-диагностика
На сегодняшний день разработаны даже экспресс-тесты, благодаря которым уже через 15 минут можно определить наличие инфекции ВИЧ. Их существует несколько видов :- Самый точный тест – это иммунохроматографический. Тест состоит из специальных полосок, на которые наносится капиллярная кровь, моча или слюна. Если выявляются антитела к ВИЧ, то полоска имеет цветную и контрольную линию. Если ответ отрицательный – заметна лишь линия.
- Наборы домашнего использования «OraSure Technologies1». Разработчик – Америка. Именно этот тест был одобрен организацией «FDA».
- Существуют и прочие экспресс-тесты, но они не обладают одобрением специалистов, поэтому и нежелательны для проведения теста.
Если выявилась положительная реакция на вирус иммунодефицита человека, необходимо дополнительно провести соответствующее обследование в клинических условиях.
Ранняя диагностика
Ранняя диагностика ВИЧ существует для того, чтобы своевременно определить риски по поражению иммунитета. Благодаря этому болезнь купируется на начальных этапах, в результате чего инфицирование других внутренних органов снижается к минимуму.Чтобы самостоятельно диагностировать патологию на ранних стадиях, обратите внимание на симптоматику, которая при этом существует:
Полимеразная цепная реакция
ПЦР или полимеразная цепная реакция используется для определения любого инфекционного возбудителя, в том числе и вируса ВИЧ. В данном случае выявляется его РНК, причем выявить возбудитель можно на очень ранних стадиях (после заражения должно пройти минимум 10 дней).Это довольно дорогостоящая диагностика, но в некоторых случаях может давать ложный результат. Поэтому при обследовании на ВИЧ дополнительно применяются и другие методики.
Количественное выражение полимеразной цепной реакции нужно для определения скорости развития ВИЧ и осложнений, например, СПИДа. Это позволяет своевременно определить прогноз на длительность жизни ВИЧ-инфицированного больного.
Иммунный блоттинг
Иммунный блоттинг является последним методом обследования больного перед точной постановкой диагноза. В основе методики лежит использование специализированной полоски (нитроцеллюлозной) с вирусными белками. Врач собирает венозную кровь, после чего отправляет её на обработку. После этого процесса белки сыворотки разделяются в гелеобразной субстанции, исходя из молекулярной массы и заряда. Для этого используется аппаратура с действующим электрическим полем. Затем в данный гель помещается вышеуказанная полоска и промакивается, то есть подвергается блоттингу. Это осуществляется в специализированной камере.Результат определяется по связыванию белков крови с белками, нанесенными на нитроцеллюлозную полоску. Если ВИЧ присутствует в организме больного, то просвечиваются единые линии. Существуют определенные показатели выявления линий, которые сигнализируют о наличии ВИЧ. Но бывают и заниженные цифры. В этом случае существует риск развития начальной стадии вируса иммунодефицита человека, образования онкологических опухолей, туберкулеза, трансфузии крови.
ИФА-тест
ИФА-тест относится к скрининговому методу обследования при подозрениях на ВИЧ. Исследование осуществляется в лабораторных условиях. Именно там создаются специфические белки заболевания, которые способны уловить белки, вырабатываемые человеческим организмом. При взаимодействии с реагентами меняется цвет индикатора. Таким образом, выявляется не сам возбудитель, а антитела к вирусу. Данный тест может выявить вирус иммунодефицита человека на ранних стадиях развития.Существует несколько видов ИФА тестов, но используются только последние разработки – 3 и 4 поколение. Методика основана на сборе кровяной жидкости из вены. Существует определенная подготовка – пациент не должен потреблять пищу на протяжении 8-ми часов до сдачи анализа. Поэтому кровь собирается натощак в утреннее время.
Как проводят диагностику во время инкубационного периода?
Инкубационный период вируса ВИЧ составляет 90 дней. В этот промежуток выявить наличие патологии сложно, но это сделать можно посредством ПЦР.После этого на протяжении года человек находится под пристальным вниманием докторов и проходит множественное обследование. Только через этот период можно с точностью установить диагноз – ВИЧ.
Особенности диагностики у детей
Если рождается ребенок у женщины с диагнозом вируса иммунодефицита человека, младенец обследуется на протяжении 3-х первых лет жизни. Дело в том, что антитела матери могут этот период находиться в кровяной жидкости ребенка. Но при этом даже анализы крови не подтверждают инфицирование. Конечно, существует множество случаев, когда болезнь устанавливается сразу же после рождения. Подробно о беременности при ВИЧ-инфекции .Первые анализы на ВИЧ у ребенка берут на вторые сутки после появления на свет. Потом по достижении 2-х месяцев, затем каждые 4 месяца.
Для выявления патологии в детском возрасте используются серологические методики обследования, ПЦР. Именно последний вид диагностирования недуга позволяет выявить на первых месяцах жизни младенца ДНК и РНК вируса. Для этого у малыша осуществляется сбор крови, которая впоследствии размещается в пробирку, содержащую консервант ЭДТА. Далее материал хранится 2 дня при температуре, не превышающей 8-ми градусов. Но и замораживать кровь не допустимо. Также может быть использована и сухая кровяная жидкость, которая получена из цельной крови и высушена.
Этапы проведения диагностики
Диагностические мероприятия по выявлению вируса иммунодефицита человека проводятся в три основных этапа:- Предварительная сортировка, она же скрининг.
- Референтная диагностика.
- Подтверждающий этап или экспертная диагностика.
Скрининг – предварительная сортировка
Предварительный этап обследования позволяет определить общие антитела посредством иммуноферментного анализа, то есть ИФА. Можно получить информацию о наличии вируса уже через 3 месяца после заражения. Но были зафиксированы случаи выявления возбудителя в более ранних стадиях – через 3 недели.Нужно знать, что ИФА может при некоторых условиях дать ложноположительный результат. Это может быть в период вынашивания ребенка, при аутоиммунных болезнях (псориазе, ревматизме, волчанке и т. д.), заболевании Эпштейн-Бара и прочих патологиях.
Референтная диагностика
На данном этапе используются разнообразные тестирования минимум дважды, максимум трижды. Если в двух случаях результат положительный – требуется этап подтверждения.Подтверждающий этап – экспертный
На данном этапе проводится диагностика с помощью иммунного блоттинга. Определяются антитела соответственно к определенным белкам возбудителя. Результат обычно точный, но бывают и случаи ложного положительного ответа. Такое возможно при терминальной степени развития СПИДа и в период затишья заболевания ВИЧ. Поэтому важно через определенное время пройти процедуру дополнительно.Ошибки при проведении диагностики
Как это ни парадоксально, но существует возможность получения ложноположительного результата. Обычно такое происходит при домашнем тестировании, особенно в случаях использования экспресс-тестов. В клинических условиях такое возможно только при определенных заболеваниях или положениях:
- период беременности;
- перекрестная реакция организма;
- аутоиммунные патологические нарушения;
- простудные заболевания в стадии обострения;
- онкологические новообразования;
- туберкулез;
- склероз.
Особенность – если человек инфицирован вирусами и грибками, то результат тестирования может быть тоже ложным. Особенно такое отмечается при аллергических состояниях.
Подготовка к сдаче анализов
Очень важно соблюдать правила подготовки к сдаче анализов на ВИЧ, потому что от этого зависит точность получения результата:- В первую очередь, Вам необходимо посетить соответствующего специалиста, чтобы он дал Вам точные указания по мероприятиям подготовки.
- Анализы крови собираются всегда натощак. Поэтому перед выходом в клинику нельзя ничего кушать. Ваше последнее потребление пищи должно осуществляться не позже 21:00.
- Запрещено курить в день сдачи анализов.
- Нельзя накануне употреблять алкогольные напитки.
- Если Вы принимаете какие-либо медикаменты, обязательно заранее проконсультируйтесь с доктором. Потому что многие препараты перед сдачей анализов на ВИЧ применять запрещено.
- Не рекомендовано за несколько дней до сбора анализа проводить ультразвуковое исследование.
- Не желательно за день-два до процедуры кушать чрезмерно жирные блюда и потреблять много сладостей.